これまでの研究で、我々はAdeno-X expression Systemを用い、VAMP-2-FLAGとGFPが同時に発現するアデノウイルス・ベクターを構築した。このウイルスをprimaryのラット耳下腺細胞、およびラット顎下腺にin vivoで導入し、生きた細胞でGFPの蛍光を共焦点レーザー顕微鏡下で観察するとともに抗FLAG抗体による免疫組織化学でVAMP-2-FLAGの発現を観察した。他方、ヒト耳下腺由来細胞HSYを用いSyntaxin-4の細胞内輸送におけるMunc18cの役割を調べた。これまでに得られた研究成果を以下に示す。 (1)コラゲナーゼ消化法で調製したprimaryの耳下腺細胞に上記アデノウイルス・ベクターを用いVAMP-2-FLAGとGFPを発現させたところ、VAMP-2-FLAGは細胞内の膜系に存在した。 (2)上記アデノウイルスをラット顎下腺に直接注入し48時間後に唾液腺を固定し免疫組織化学的に観察したところ、VAMP-2-FLAGは主として顎下腺線条部導管に発現し、細胞の基底側小胞体に強い反応が認められた。 (3)HSY細胞にGFP-Syntaxin-4を発現したところ未同定の膜構造を形成し、細胞膜への輸送・発現は見られなかった。しかし、Syntaxin-4結合タンパク質であるMunc18cを共発現したところSyntaxin-4とVAMP-2やSNAP-23との結合は抑制され、細胞膜での発現が認められた。この結果、Munc18cはSyntaxin-4とVAMP-2やSNAP-23を含む他のタンパク質との相互作用を抑制し、Syntaxin-4を細胞膜まで確実に輸送する役割を担っていることが示唆された。
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