| 研究概要 |
Actinobacillus actinomycetemcomitans(Aa)由来cytolethal distension toxin(Cdt)は,哺乳類細胞に対して細胞死とともに細胞周期G2期停止を誘導するが,その分子機構はまだ明らかにされていない。ヒトパピローマウイルス16型(HPV-16)および18型(HPV-18)は,肛門生殖器癌と一部の口腔咽頭癌の発症に深く関与する。これらのウイルスのE7癌遺伝子産物は,網膜芽細胞腫関違遺伝子産物(Rb)に直接結合してRbの増殖抑制機能を阻害し,E6癌遺伝子産物は,P53遺伝子産物の分解・不活化を引き起こす。このようにHPV-16および18は,Rbおよびp53の不活化によって,宿主細胞を癌細胞に変化させる。我々は,HPV-18関連癌細胞株であるHeLa細胞においてAaCdtが,P53発現レベルの増加とともにG2期停止と細胞死を誘導することをあきらかにした。
平成14年度の研究では,HPV関連癌細胞におけるCdtによるP53集積機構を解析するために,HPV陽性細胞(HeLa, SiHa)でのRNAiを確立した。先ず,すでにRNAi活性が報告されているLamin A/Cに相補的な19塩基の配列の2本鎖RNA(siRNA)を合成し,これをリポソーム試薬によって細胞内に導入後,その発現におよぼす効果をウエスタンブロット法により解析した。HeLa細胞とSiHa細胞のいずれにおいても90%以上のLamin A/Cの発現抑制効果が見られた。さらに,SiHa細胞では,HPV16 E6およびE7に対するsiRNAが,E6およびE7の発現をそれぞれ70%から80%抑制することが判明し,これらの細胞は,高いsiRNA導入効率と感受性を有することが明らかとなった。今後,siRNAをもちいて,ATM, ATR, Chk1, Chk2, DNA-PKおよびARF等の発現を抑制することにより,どの分子がp53の細胞内集積に重要であるかを明らかにする予定である。
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