EGF刺激によるヒト口腔癌細胞の運動シグナル伝達の解析

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13672115
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 柴田 敏之 岐阜大学, 医学部, 教授 (50226172)
• 研究分担者: 加藤 幸弘 岐阜大学, 医学部, 助手 (30293567) ; 土井田 誠 岐阜大学, 医学部・附属病院, 講師 (90313890) ; 永易 裕樹 北海道医療大学, 歯学部, 講師 (90265075)
• キーワード: HUMAN / SCC / ORAL CANCER / EGF / INVASION / METASTAIZS

研究概要

現在保有するヒトロ腔扁平上皮癌細胞株のうち、運動能の変化を指標として得たEGF刺激に対し、高感受性を示すクローン、低感受性のクローン、さらには外因性のEGF刺激を必要とせずEGFオートクリン・ループにて高い運動能を持続しているクローンを用いて、以下の検討を行った。
[I] EGF刺激シグナル伝達に関与するPKC分子種の解析
高感受性クローンを用い、
EGF受容体リン酸化(erbBホモ二量体)⇒PLCγ活性化⇒PKC活性化
EGF受容体リン酸化(erbB,erbB3ヘテロ二量体)⇒PI3活性化⇒PKC活性化
に関与するPKCの分子種を特定するために、PLC,PI3阻害剤存在下におけnPKCδおよびaPKCξの細胞内局在の変化を抗PKC MoAbを用いて、a)共焦点レーザー顕微鏡による観察 b)細胞分画のWestern Blottingによる観察を行った。
この結果、ホモ二量体刺激はnPKCδを活性化すること、ヘテロ二量体刺激はaPKCξを活性化することが明らかとなった。
[II] 高感受性クローンと低感受性クローン間の比較
低感受性クローンと、高感受性クローンを用いて、DNAマイクロアレイにて、遺伝子発現(mRNAの発現)の差異を検討した所、約20種類の項目において、有意な差異が観察された。(但し、相互関係等については不明)

研究成果

• [文献書誌] D.Hatakeyama, O.Kozawa, T.Shibata et al.: "Zinc suppresses IIL-6 synthesis by prostaglandin F2alpha in osteoblasts : inhibition of phospholipase C and phospholipase D"Journal of Cellular Biochemistry. (in press). (2002)
• [文献書誌] Z.Topcu, I.Chiba, T.Shibata et al.: "CYP2A6 Gene Deletion Reduces Oral Cancer Risk in Betel Quid Chewers in Sri Lanka"Carcinogenesis,2002,in press. (in press). (2002)
• [文献書誌] D.Nakata, J.Hamada, T.Shibata et al.: "Enhancement of tumorigenic, metastatic and in vitro invasive capacity of rat mammary tumor cells by transforming growth factor-"Cancer Letters 175(2002)95-106. 175. 95-106 (2002)
• [文献書誌] D.Hatakeyama, O.Kozawa, T.Shibata et al.: "Upregulation by retinoic acid of TGF-beta-stimulated hcat shock protein 27 induction in osteoblasts : involvement of mitogen-activated protein kinases"BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA,2001,in press. (in press). (2002)
• [文献書誌] J.Hamada, D.Nakata, T.Shibata et al.: "Increased Oxidative DNA Damage in Mammary Tumor Cells by Continuous Epidermal Growth Factor Stimulation"Journal of the National Cancer Institute. 93. 214-216 (2001)