| 研究課題/領域番号 |
13672156
|
|---|
| 研究機関 | 徳島大学 |
|---|
研究代表者 |
横山 正明 徳島大学, 歯学部・附属病院, 助手 (10314882)
|
|---|
| 研究分担者 |
玉谷 香奈子 徳島大学, 歯学部, 助手 (40243711)
日野出 大輔 徳島大学, 歯学部, 助教授 (70189801)
中村 亮 徳島大学, 歯学部, 教授 (30034169)
横山 希実 徳島大学, 歯学部, 助手 (40325270)
|
|---|
| キーワード | 歯周病原細菌 / 歯周ポケット / 歯肉上皮細胞 / 歯肉繊維芽細胞 / MMP / TNFα / TGFβ |
|---|
| 研究概要 |
本年度は、歯周組織に炎症のない歯肉片から得られたヒト歯肉上皮細胞(HGE)およびヒト歯肉線維芽細胞(HGF)を用いて、MMP-1、-2、-9の産生について調べた。まず、6ウエルプレートにコンフルエントモノレイヤーを形成した各歯肉細胞よりmRNAを分離抽出し、各MMPに対する既知のプライマーを用いて通法に従いRT-PCRを行った。その結果、HGEでは調べたすべてのMMPのmRNA発現が確認できたものの、HGFではMMP-1、-2のmRNAは常に発現が確認できたが、MMP-9では検出されないケースがあッた。各細胞をTNFαおよびTGFβで刺激してmRNA発現を調べた結果、HGEでは10ng/mlのTGFβにより、HGFでは100ng/mlのTNFαによりすべてのmRNA発現が上昇する傾向がみられた。
各細胞の培養上清をサンプルとしてザイモグラフィーを行い、MMP-2およびMMP-9の活性が検出できるかどうか調べた結果、HGEではMMP-9に相当するバンドが必ず認められ、MMP-2に相当するバンドも弱いながら確認できた。HGFではMMP-2に相当するバンドが必ず認められ、MMP-9に相当するバンドはTNFαで刺激した時のみ認められた。なお、ザイモグラムで検出されたバンドが各MMPに相当することは、ケミルミネッセンスを利用したウエスタンブロット法で確認している。
歯周病原細菌の菌体成分(カンピロバクター・レクタスの菌体表層成分、ポルフィロモナス・ジンジバリスの外膜小胞など)について調べたが、各細胞のMMP産生を誘導するような所見は現在のところ得られていない。
|
