血液系細胞の初期分化過程に働く分子の探索法の開発とその応用

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13672281
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 山元 弘 大阪大学, 薬学研究科, 教授 (50127312)
• 研究分担者: 辻川 和丈 大阪大学, 薬学研究科, 助手 (10207376)
• キーワード: 胎児肝臓 / 胸腺 / 間質細胞 / 血液系幹細胞 / 未熟T細胞 / 増殖因子

研究概要

血液系細胞は、胎児期にAGM領域にその源を発した造血系幹細胞前駆細胞由来であり、前駆細胞は胎児肝臓に移行し造血系幹細胞となり、次いで骨髄へ、一部は胸腺へ移行し血液系細胞に分化する。本研究では、胎児肝での血液系幹細胞と肝臓細胞の相互作用、胸腺での未熟T細胞と胸腺間質細胞との相互作用に関わる分子について検索し、以下のことを明らかにした。
1:胎児肝での細胞間相互作用を調べる目的で、胎児肝臓の付着性細胞(間質細胞群)と非付着性細胞(血液系幹細胞群)の共培養実験系を樹立し、両細胞間の相互作用を検出する系を確立した。
2:胎児肝臓器官培養法を樹立した。器官培養系でも肝臓分化が正常に起こること、それに伴って血液系細胞のポピュレーションが変わることを確認した。
3:上記共培養系、胎児肝臓器官培養系いずれにおいても、抗インテグリン(α4)抗体が血液系細胞の増殖を抑制した。他のインテグリンについては顕著な効果は認められなかった。
4:胎児肝臓付着性細胞を免疫して付着性細胞特異的モノクロナル抗体を作成し、上記共培養系、胎児肝臓器官培養系で血液系細胞の増殖を強く阻止する新規モノクロナル抗体を得た。
5:新規モノクロナル抗体が認識する分子を精製し、アミノ酸配列を決定したところ、抗体はCD13分子を認識していることが判った。
6:CD13機能を阻止することが知られているUbenimexを上記共培養系に添加したとき、血液系幹細胞の増殖は阻止された。以上、胎児肝臓での血液系幹細胞の増殖には、インテグリン(α4)とCD13分子が関与していることを明らかにした。
7:未熟胸腺T細胞の増殖にかかわる新しい分子として、リン脂質分解制御分子の一部、サポシンAを単離同定した。

研究成果

• [文献書誌] Fukuda, S., et al.: "Muscle regeneration by reconstitution with bone marrow or fetal liver cells from green fluorescent protein-gene transgenic mice"Journal of Cell Science. 115. 1285-1293 (2002)
• [文献書誌] Miyauchi, K., et al.: "Molecular cloning and characterization of mouse calcitonin gene-related peptide receptor"Neuropeptides. 36. 22-33 (2002)
• [文献書誌] Yuasa, K., et al.: "Adeno-associated virus vector-mediated gene transfer into dystrophin-deficient skeletal muscles evokes enhanced immune response against the trausgene product"Gene Therapy. 9. 1576-1588 (2002)
• [文献書誌] Tsujikawa, K., et al.: "Regulation of Lck and Fyn tyrosine kinase activities by trausmembrane protein tyrosine phosphatase LAR"Molecular Cancer Research. 1. 155-163 (2002)
• [文献書誌] Nishiyama, S., et al.: "Dietary cadmium inhibits spontaneous hepatocarcinogenesis in C3H/HeN mice and hepatitis in A/J mice, but not in C57BL/6 mice"Toxicology and Applied Pharmacology. 186. 1-6 (2003)
• [文献書誌] Kohama, Y., et al.: "Isolation of proliferation factor of immature T cell clone in concanavalin A-stimulated splenocyte culture supernatant"Immunology. (in press). (2003)