| 研究概要 |
本研究の目的は,免疫細胞上の補助刺激にかかわるリガンド/レセプター分子に対する特異的なヒト型抗体(単鎖Fv)をファージディスプレイシステムによって作製し,その抗体を用いた免疫細胞の標的化と補助刺激シグナルの阻害による免疫反応の活性化の制御法を確立,そのシステムを応用した効果的なDNAワクチンのベクターの設計,開発を行うことである。
我々は,人末梢血のB細胞のcDNAを基に,抗体のFv領域の遺伝子ライブラリ(VHとVL)を作製し,そのライブラリをPCRによって増幅するとともに,単鎖Fv(scFv)化した形で,ファージ表面に提示したファージディスプレイヒトscFv抗体ライブラリを構築している。本年度は、このライブラリを用いて,ヒトT細胞上のいくつかの補助刺激分子と抗原禎治細胞(APC)上のリガンドを標的とした抗体ファージをパニングによって単離した。得られたファージクローンから,抗体遺伝子を可溶性抗体として、大腸菌に発現させ、その結合活性、リガンド・レセプター間の相互作用に対する阻害活性について評価した。
APC上の補助刺激分子リガンドであるCD86に特異的に結合するscFvファージクローンがDNAシークエンス解析の結果4種類得られた。これらのクローンを基に可溶性scFvを大腸菌に発現させたところ、いずれのクローンとも可溶清蛋白質として細胞外ならびにペリプラズム画分に発現されたが、その結合活性は、クローンならびに発現画分によって異なっていた。これらのscFvは、いずれも、CD86とそのレセプターであるCTLA-4との結合を阻害したが、その結合力は、Kd値で、数十nMであった。その他の補助刺激分子に対する抗体を取得して、特許申請を行い、本研究を遂行する予定である。
|
