| 研究課題/領域番号 |
13672394
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
応用薬理学・医療系薬学
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| 研究機関 | 宮崎医科大学 |
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研究代表者 |
小林 英幸 宮崎医科大学, 医学部, 助教授 (40148953)
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| 研究分担者 |
横尾 宏毅 宮崎医科大学, 医学部, 助手 (30332894)
柳田 俊彦 宮崎医科大学, 医学部, 助手 (60295227)
和田 明彦 宮崎医科大学, 医学部, 教授 (30131949)
上園 保仁 長崎大学, 医学部, 講師 (20213340)
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| 研究期間 (年度) |
2001 – 2002
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| キーワード | 脳微小血管 / アクアポリン / 培養内皮細胞 / 虚血・低酸素 / アストロサイト / 発現調節 / 細胞障害性浮腫 / 不死化細胞 / Immortalized cell |
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| 研究概要 |
脳微小血管のアクアポリン(AQP)サブタイプの発現調節機構を解析し、その病態生理学的意義を明らかにしようとした。
微小血管を、ラット大脳皮質から高濃度アルブミン溶液を使用した浮遊遠心分離とグラスビーズろ過法を用いて調製した。AQPサブタイプ1-5のmRNAは、逆転写-ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)で解析した。AQP1 mRNAの発現量は少なく、ポジティブコントロールとして用いた腎での発現の1/100以下であった。AQP4 mRNAは、腎と同程度発現していた。脳微小血管のAQP1蛋白は28kDaで、その発現量は腎の1/10以下であった。腎で40kDaのバンドとして検出された糖付加型は発現していなかった。AQP4蛋白は、30kDaのバンドとオリゴマーと考えられる高分子量のバンドと、さらに分子量の高い不溶性のバンドとして検出された。免疫組織化学染色ではAQP1シグナルは非常に弱かったが、AQP4は、微小血管内皮細胞の細胞膜に局在していた。初代培養脳微小血管内皮細胞に培養アストロサイトの培養液を添加し培養するとAQP1 mRNAレベルは20%減少した。また、SV40で不死化したラット脳微小血管内皮細胞GP8では、アストロサイト培養液の添加により70%減少した。一方、GP8を1% 0_2の低酸素下で培養すると、AQP1 mRNAは18時間後に2.5倍に増加した。
AQP1は、アストロサイト由来因子により発現が抑制されていること、また低酸素により発現が増加することよりAQP1は細胞障害性浮腫を生じる原因分子である可能性が示唆された。
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