| 研究概要 |
大腸菌ゲノム上には複製開始点(oriC)とは別に複製開始タンパク質DnaAを多量に結合する部位(datA)が存在し、この部位は複製が過剰に開始するのを抑制している事をこれまでに明らかにしてきた。本研究ではこれまでの研究をさらに進展させ以下の結果を得た。
1.datA以外のDnaA結合部位の開始制御への関与の検討 datA以外で特に強力と考えられている7つのDnaA結合部位に変異を持つ株を作成し解析した結果、DnaA結合能は大きく低下していたが、複製開始は正常であった。従ってDnaAを結合することにより過剰な開始を抑制するという機能はdatAに固有と思われる。
2.datA内の個々のDnaA結合配列(DnaA box)の役割 datA領域内のDnaA boxに変異を導入した大腸菌株を作成し解析した。変位導入によりDnaA結合能は大きく低下していたが、2番目あるいは3番目のDnaA box以外は変位導入の影響が見られず、1,4,5番目のDnaA boxを同時に破壊した場合も複製開始は正常であった。2番目および3番目のDnaA boxに結合したDnaAが核となってdatA領域全体に多量のDnaA分子が結合する事が示唆された。
3.DnaAのdatAへの結合機構 DnaAのdatAへの結合とoriCへの結合をin vitroで比較した。結合量は同程度であったがoriCへの結合の方が速く生じた。この結果はdatAが一時的にDnaAをプールする役割を担っているというモデルに合致する。
4.datAに結合する新たな因子の発見 2番目と3番目のDnaA boxの間にIHFタンパク質が結合する事を見出した。さらにこの結合によりDnaAの結合量が著しく上昇する事を見出した。
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