転写とDNA修復に関与するXAB2複合体の機能解析

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13680763
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 中津 可道 九州大学, 医学研究院, 助教授 (00207820)
• キーワード: ヌクレオチド除去修復 / 転写と共役したDNA修復 / XAB2 / RNAポリメラーゼII / 遺伝子欠損マウス / XPA / CSA / CSB

研究概要

ヌクレオチド除去修復(NER)にはゲノム全般で働く機構と転写と共役した機構(TC-NER)の2つのサブ機構がある。これまでに我々はXAB2はXPA, CSA, CSB/RNAポリメラーゼII複合体と相互作用し、転写とTC-NERの両機構に関与していることを示した。XAB2の機能を解明するためにFlag-XAB2をHeLa細胞で発現させ、抗Flag抗体、ゲル濾過、miniQを用いて精製すると、Flag-XAB2は5種の蛋白質(p160,p57,p50,p42,p35)と同一画分に精製され、これら5種の蛋白質はXAB2と強固な複合体を細胞内で形成していると考えられた。p160はPTGSへの関与が示唆されており、p57は核マトリクス因子、p50はU1-like Zn-fingerをもつRNA結合タンパク質、p42は酵母のスプライス因子ISY1のホモログで、p35はRNA結合能を持つpeptidylprolyl cis-trans isomerase Eであった。これらのことはXAB2複合体がRNA代謝に関与していることを強く示唆する。精製XAB2複合体を、RNAポリメラーゼIIによるin vitro転写系に加えると転写伸長反応を促進する効果がみられ、抗XAB2抗体の細胞内マイクロインジェクションがTC-NER及びRNAの転写を阻害すること一致する。これまでに、遺伝子ターゲティング法を用いてXAB2欠損マウスの作成を行い、XAB2が生存に必須であることを示した。XAB2は必須遺伝子なので完全欠損マウスおよび細胞は得ることができなかった。欠失変異体を用いた解析の結果、p35のRNA結合ドメインがXAB2と直接結合することが判明したので、XAB2複合体の機能解析のためにp35遺伝子ターゲテイングベクターの作製を行い、p35欠損マウスおよび細胞の樹立を行っている。

研究成果

• [文献書誌] Yoshino M, Nakatsu Y, Riele H, Hirota S, Kitamura Y, Tanaka K.: "Additive roles of XPA and MSH2 genes in UVB-induced skin tumorigenesis in mice"DNA Repair. 1・11. 935-940 (2002)
• [文献書誌] Murai M, Enokido Y, Inamura N, Yoshino M, Nakatsu Y, van der Horst GT, Hoeijmakers JH, Tanaka K, Hatanaka H.: "Early postnatal ataxia and abnormal cerebellar development in mice lacking Xeroderma pigmentosum Group A and Cockayne syndrome Group B DNA repair genes"Proc.Natl.Acad.Sci.U S A. 98・23. 13379-13384 (2001)
• [文献書誌] Tanaka K, Kamiuchi S, Ren Y, Yonemasu R, Ichikawa M, Murai H, Yoshino M, Takeuchi S, Saijo M, Nakatsu Y, Miyauchi-Hashimoto H, Horio T.: "UV-induced skin carcinogenesis in xeroderma pigmentosum group A (XPA) gene-knockout mice with nucleotide excision repair-deficiency"Mutation Research. 477・1-2. 31-40 (2001)
• [文献書誌] Nakatsu Y.: "Transcription-coupled repair and Cockayne syndrome"Tanpakushitsu Kakusan Koso. 46. 908-915 (2001)