| 研究課題/領域番号 |
13680803
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
宿南 知佐 京都大学, 再生医科学研究所, 助教授 (60303905)
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| 研究分担者 |
山田 秀一 京都大学, ウィルス研究所, 助手 (20261133)
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| キーワード | ChMrP / tenomodulin / chondromodulin-I / 強靭結合組織 / ノックアウトマウス / 腱 / 血管侵入障壁 / 血管新生 |
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| 研究概要 |
chondromodulin-I related proein(ChMrP:最近tenomodul inと正式に命名)は、軟骨由来血管新生抑制因子chondromodulin-I(ChM-I)の関連遺伝子で、血管網に乏しい強靱結合組織に特異的に発現している。本年度は、ChMrP/tenomodulin遺伝子の制限酵素マップに基づいて、ジーンターゲティング用のターゲティングベクターを構築した。転写開始点を含む遺伝子の上流領域とexon1/intron1/exon2とintron2の一部をNeomycin phosphotransferase(Neo)で置換し、3'側にThymidine kinase(tk)を挿入してポジティブーネガティブ選択が行えるベクターを構築した。また、ターゲティングベクターの構築と平行して、相同組換え体の選別のために、5'相同遺伝子領域と3'相同遺伝子領域でDNAプローブ領域を決定した。同時に、迅速な解析の為に、ターゲティングベクターに含まれない遺伝子座領域、内在遺伝子座領域、外来遺伝子座領域の3つの領域にプライマーを設計し、PCR法によって相同組換え体の判定が行えるような条件を設定した。更に、ターゲティングベクターをエレクトロポレーション法によってES細胞に導入し、遺伝子導入したES細胞からDNAを抽出して、PCR法、サザンブロットによって相同組換え体の判定を行った。150クローンに関して判定を行ったが、現在のところ陽性クローンはまだ得られておらず、継続してスクリーニングを行っている。
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