脳特異的侵入を規定するミクログリアの遺伝子の単離

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13680854
• 研究機関: 藤田保健衛生大学
• 研究代表者: 澤田 誠 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 教授 (10187297)
• キーワード: ミクログリア / 遺伝子導入 / 脳特異的 / ドラッグデリバリシステム / ファージディスプレイ / 血液脳関門

研究概要

1 脳特異的な細胞移入の調節メカニズムの検討
ラット個体を用いてミクログリアの脳特異的侵入の条件を検討し、外来遺伝子を脳に特異的に発現させることに成功した。また、導入した遺伝子産物の活性測定によって細胞の移入量を定量することができるようになった。
(1)マクロファージ注入の場合、脳にはほとんど蛍光細胞が見られないが肝臓には多く見られた。ミクログリア注入の場合には脳には多く、肝臓にはわずかしか見られなかった。
(2)lacZ発現ベクターを導入した細胞を注入したラット脳切片でlacZ陽性細胞が確認できた。
(3)2と同様の切片でのβ-galactosidase活性が検出できた
2 組換えファージの生物活性のスクリーニングの確立
培養脳血管内皮細胞による再構成血液脳関門システムでミクログリアの血液脳関門を形成している血管内皮細胞への特異的接着現象が再現できるようになった。
3 脳特異的な細胞移入に関与する分子の単離同定
ミクログリア細胞株からmRNAを精製してcDNAを合成し、ファージディスプレイライブラリーに組み込みをおこなった。また、ランダムペプチドライブラリーも作成し脳特異的接着に関わる脳側の因子(ホーミングレセプター)の検索も行える準備が整った。

研究成果

• [文献書誌] Suzuki, H., Imai, F., Kanno, T., Sawada.M: "Preservation of neurotrophin expression in microglia that migrate into the gerbil's brain across the blood brain barrier"Neurosci.Lett.. 312. 95-98 (2001)
• [文献書誌] Iwata, A., Miura, S., Kanazawa, I., Sawada, M., Nukina, N: "a-Synuclein forms a complex with transcription factor Elk-1"J.Neurochem.. 77. 239-252 (2001)
• [文献書誌] Katoh, Y., Niimi, M., Yamamono, Y., Kawamura, et al.: "Histamine production by cultured microglial cells of the mouse"Neurosci.Lett.. 305. 181-184 (2001)
• [文献書誌] Ishiguro, H., Yamada, K., Sawada.H., Nishii, K., et al.: "Age-dependent and tissue-specific CAG repeat instability occurs in mouse knock-in for a mutant Huntington's disease gene"J.Neurosci.Res.. 65. 289-297 (2001)
• [文献書誌] Imamura, K., Sawada, M., Ozaki, N., et al.: "Activation mechanism of brain microglia in patients with diffuse neurofibrillary tangles with calcification"Alzheimer Dis.Assoc.Disord.. 15. 45-50 (2001)