脳の層構造形成に関係した新規Deltaに対する,レセプターのクローニング

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13680867
• 研究機関: 信州大学
• 研究代表者: 中山 耕造 信州大学, 医学部, 講師 (70192680)
• キーワード: 大脳皮質 / subplate / preplate / Delta / Notch

研究概要

我々は、マウスの胎児脳から、分岐したDeltaをコードする遺伝子をクローニングした。大脳の発生過程において、この遺伝子はpreplateの一部であるsubplate neuronに選択的に、かつ一過的に発現し、層構造形成への関与が示唆される。また、大脳皮質ニューロンのprimary cultureに、細胞外ドメインのみを発現させ可溶化したこの分子を加えると、細胞の形態が変化し、進展していた神経突起が著しいretractionをおこす。これらの結果から、皮質を形成するニューロンがsubplateを通り抜けるときにレセプターを介して、subplate上に発現しているこの分子と接触して、なんらかの調節を受けている可能性が考えられる。さらに、視床から大脳への投射を調節している可能性も考えられる。
この分子の細胞外ドメインにalkaline phosohataseを結合し、293T細胞に導入して、培地中にフュージョン蛋白質を分泌する系を作った。この培地中に分泌されたフュージョン蛋白質を精製し、マウスの胎児を用いてこのフュージョン蛋白質がどこに結合するかを検討したところ、受精後14-16日目の大脳皮質に結合活性が認められた。
受精後10日目のマウス胎児の頭部から神経幹細胞を分離し、分化を誘導する条件で培養して、各分化段階の細胞からRNAを抽出し、発現ベクターを用いてcDNAライブラリーを作製した。現在、このライブラリーをCOS7細胞に導入して発現させ、前述のフュージョン蛋白質をプローブに、alkalin phosphatase活性を指標にスクリーニングしている。

研究成果

• [文献書誌] Ebara S.: "The regulatory mechanism of BMP expression and its signal transduction"Spine 総説. (in press).
• [文献書誌] Ohta K.: "Inhibitory effects of pyrrolidine dithiocarbamate on endotoxin-induced ureitis in Lewis rats"Invest. Ophthalmol. Vis. Sci.. 43. 744-750 (2002)
• [文献書誌] Sugane K.: "Diagnosis of Toxoplasma meningoencephalitis in a non-AIDS patient using PCR"J. Infection. 42. 159-160 (2001)
• [文献書誌] Li W.: "Characterization of a novel synGAP isoform, synGAP-beta"J. Biol. Chem.. 276. 21417-21424 (2001)
• [文献書誌] Hamano H.: "High serum IgG4 concentration in patients with Sclerosing Pancreatitis"New. Eng. J. Med.. 344. 732-738 (2001)
• [文献書誌] Masumoto J.: "Marine ortholog of ASC, a CARD-containing protein, self-associates and exhib distribution in developing mouse embryos"Experimental Cell Research. 262. 128-133 (2001)