エイズ病態進行に関わる遺伝子多型の分子機構の解明

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13770151
• 研究種目: 奨励研究(A)
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 中山 英美 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (70324845)
• キーワード: HIV-1 / IL4 / CCR5 / SNP / Promoter assay

研究概要

1.IL-4-589T近傍の多型の連鎖の有無を解析したところ、IL4-589TはIL-4遺伝子内で0.5kb離れたSNPおよび6kb離れた第3イントロンの繰り返し配列の長さの長短と連鎖しているが、IL-13のSNPとは連鎖が認められず、IL-4-589Tの効果は、IL-13ではなくIL-4の遺伝子変異によることが明らかとなった。そしてレポーター遺伝子を用いてプロモーター活性を測定したところ、IL4-589Tのほうが、Cである場合よりもプロモーター活性が高いことがわかった。、それぞれの多型を持つ人でのIL-4の産生細胞をフローサイトメーターで数えたところ、-589Tを持つ人のほうがマイトジェン刺激に対して多くの細胞が誘導され、培養上清中のIL4量も高い傾向にあることがわかった。
2.CCR5 927Tのプロモーター活性の測定を、T細胞株Jurkat, U937および末梢血リンパ球を用いておこなったが、927Tのものと、そうでないもので差はなかった。またCCR5 927Tがイントロンの中にあるため、スプライシングヘの影響も検討できる形のコンストラクトを作成して実験を行ったが、やはり927Tのものと、そうでないものとで差はなかった。CCR5 927Tは染色体上で近傍に位置し、HIV-1コレセプターでもあるCCR2の翻訳領域の変異(CCR2 64I)とほぼ完全に連鎖している。そこで、病態進行の遅延を決定しているのはCCR5 927TではなくCCR2 64Iである可能性を検討することにした。CCR2遺伝子からはalternative splicingによってCCR2aとCCR2bの2つのタンパク質が産生される。現在、CCR2aとCCR2bを発現する組み換えワクシニアウイルスおよびセンダイウイルスを作成中である。

研究成果

• [文献書誌] X.Xin, K.Nakamura, H.Liu, EE Nakayama, M Goto, Y Nagai, Y Kitamura, T Shioda, A Iwamoto: "Novel polymorphisms in human macrophage inflammatory protein-1 alpha(MIP-1α)gene"Genes and Immunity. 2. 156-158 (2001)
• [文献書誌] Tatsuo Shioda, *Emi E.Nakayama, Yuetsu Tanaka, Xiaomi Xin, Huanliang Liu, Ai Kawana-Tachikawa, Atsushi Kato, Yuko Sakai, Yoshiyuki Nagai, Aikichi Iwamoto *Equally contribute to the first author: "Naturally occuring deletional mutation in C-terminal cytoplasmic tail of CCR5 affects surface trafficking of CCR"Journal of Virology. 75. 3462-3468 (2001)
• [文献書誌] Emi E.Nakayama, Laurence Meyer, Aikichi Iwamoto, Anne Persoz, Yoshiyuki Nagai, Christine Rouzioux, Jean-Francois Drlfraissy, Patrice Debre, Dorian McIlroy, Ioannis Theodorou, Tatsuo Shioda, SEROCO Study Group: "Protective effect of IL-4-589T polymorphism on HIV-1 disease progression : relationship with viral load"Journal of Infectious Disease. (発表予定). (2002)
• [文献書誌] Suda Louisirirotchanakul, Huanliang Liu, Anuvat Roongpisuthipong, Emi E.Nakayama, Yutaka Takebe, Tatsuo Shioda, Chantapong Wasi: "Genetic analysis of HIV-1 discordant couples in Thailand : Association of CCR2 64I homozygosity with HIV-1-negative status"Journal of AIDS. 29. 314-315 (2002)