2002 年度実績報告書

フォンビルブランド因子特異的切断酵素のモノクローナル抗体を用いた精製と構造機能解析

研究課題

研究課題/領域番号	13770583
研究機関	奈良県立医科大学
研究代表者	松本雅則奈良県立医科大学, 輸血部, 助手 (60316081)
キーワード	フォンビルブランド因子 / VWF-CP / ADAMTS13
研究概要	フォンビルブランド因子特異的切断酵素(VWF-CP)の精製をFujikawaらの方法をもとに改変し行った。蛋白精製の出発材料は有効期限切れの新鮮凍結血漿(fresh frozenplasma、FFP)である。これをDFPで処理し、その後lysin-sepharoseカラムを通して、まず血漿中のplasminogenを除去した。以後、硫安沈澱、butyl-sepharoseカラム、Q-sepahroseカラム、superdex200カラムにてVWF-CPを部分精製した。これを抗原として、マウスとウサギに免疫し、前者からはモノクローナル抗体を、後者からはポリクローナル抗体を作成した。モノクローナル抗体は、ELISAおよびウエスタンブロットでスクリーニングを行ったが、VWF-CPに特異的に反応するモノクローナル抗体は得られなかった。しかし、ポリクローナル抗体は、ウエスタンブロットでVWF-CPと強く反応し、また酵素活性を阻害することも確認した。阻害力価は、ポリクローナル抗体IgG 1mgあたり8.9 Bethesda Unitであった。なお、1 Betheda UnitはVWF-CP活性を50%阻害する力価である。今後、このポリクローナル抗体を用いVWF-CPを精製するか、遺伝子発現したVWF-CPを用いてマウスにするかして、再度モノクローナル抗体の作成を試みる予定である。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Sugimoto M, et al.: "Mural thrombus generation in type 2A and 2B von Willebrand disease under high shear conditions"Blood. 101. 915-920 (2003)
[文献書誌] Ashida A, et al.: "A successful treatment of a young infant who developed high-titer inhibitors against WWF-cleaving protease (ADAMTS13)"American Journal of Hematology. 71. 318-322 (2002)
[文献書誌] Kokame K, et al.: "Mutations and common polymorphisms in ADAMTS13 gene responsible for von Willebrand factor-cleaving protease activity"Proceedings of National Academy Science USA. 99. 11902-11907 (2002)
[文献書誌] Park Y-D, et al.: "Impaired activity of plasma von Willebrand factor-cleaving protease may predict the occurrence of hepatic veno-occlusive disease after stem cell"Bone Marrow Transplantation. 29. 789-794 (2002)
[文献書誌] Mori T, et al.: "Predicting response to plasma exchange in patients with thrombotic thrombocytopenic purpura with measurement of WWF-cleaving protease activity"Transfusion. 42. 572-580 (2002)
[文献書誌] Hayashi T, et al.: "Low-dosage intravenous immunoglobulin in the management of a patient with acquired von willebrand syndrome associated with monoclonal gammopathy of undetermined significance"Pathophysiology of Haemostasis and Thrombosis. 32. 33-39 (2002)
[文献書誌] 松本雅則他: "血小板血栓形成の分子機構"アイプリユム. 407 (2002)

2002 年度 実績報告書

フォンビルブランド因子特異的切断酵素のモノクローナル抗体を用いた精製と構造機能解析

研究代表者

松本 雅則 奈良県立医科大学, 輸血部, 助手 (60316081)

研究成果

[文献書誌] Sugimoto M, et al.: "Mural thrombus generation in type 2A and 2B von Willebrand disease under high shear conditions"Blood. 101. 915-920 (2003)

[文献書誌] Ashida A, et al.: "A successful treatment of a young infant who developed high-titer inhibitors against WWF-cleaving protease (ADAMTS13)"American Journal of Hematology. 71. 318-322 (2002)

[文献書誌] Kokame K, et al.: "Mutations and common polymorphisms in ADAMTS13 gene responsible for von Willebrand factor-cleaving protease activity"Proceedings of National Academy Science USA. 99. 11902-11907 (2002)

[文献書誌] Park Y-D, et al.: "Impaired activity of plasma von Willebrand factor-cleaving protease may predict the occurrence of hepatic veno-occlusive disease after stem cell"Bone Marrow Transplantation. 29. 789-794 (2002)

[文献書誌] Mori T, et al.: "Predicting response to plasma exchange in patients with thrombotic thrombocytopenic purpura with measurement of WWF-cleaving protease activity"Transfusion. 42. 572-580 (2002)

[文献書誌] Hayashi T, et al.: "Low-dosage intravenous immunoglobulin in the management of a patient with acquired von willebrand syndrome associated with monoclonal gammopathy of undetermined significance"Pathophysiology of Haemostasis and Thrombosis. 32. 33-39 (2002)

[文献書誌] 松本雅則他: "血小板血栓形成の分子機構"アイプリユム. 407 (2002)

2002 年度実績報告書

松本雅則奈良県立医科大学, 輸血部, 助手 (60316081)