| 研究概要 |
1、平成13年度研究計画、方法に従い、LacZ(control, C群)、C/EBPα(positive control, A群)、C/EBPζ(negative control, Z群)のアデノウイルスをそれぞれ3T3-L1脂肪細胞に感染させ、下記の実験結果を得た。
(1)脂肪分化の指標となる脂肪滴の量的評価として、細胞抽出液中の中性脂肪量を測定したところ、A群では、C群と比較して約22%蓄積中性脂肪が増加、逆にZ群では約73%の著明な減少を得た。
(2)インスリン刺激によるグルコース取り込み量をそれぞれ検討したところ、A群ではC群と比べて有意差なく、Z群ではC群と比べて約35%低下していた。
(3)Z群によるグルコース取り込みの減少の原因を検索するため、インスリン刺激後のIR、IRS-1の蛋白量、リン酸化、PI-3キナーゼ活性の上昇、Aktのリン酸化について、ウエスタンブロッティング法や生化学的手法を用いて検討した。C群と比較して、Z群では、IRの蛋白量が30%まで著明に低下、IRのリン酸化も約41%低下していた。これに伴い、IRS-1のリン酸化やPI-3キナーゼ活性やAktのリン酸化も、それぞれ、40%、55%、53%の低下が観察された。以上の事から、C/EBPαの過剰発現では、インスリン感受性には変化がないものの、脂肪細胞分化に促進的に働くことがわかった。また、C/EBPζの過剰発現により、C/EBPαの働きをブロックすると、脂肪分化を顕著に抑制するとともに、主にIRの転写を抑制し、蛋白発現を抑制することによって、脂肪細胞のインスリン感受性を低下させることがわかった。
2、平成14年度
現在、予定通り計画進行中である。
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