| 研究概要 |
手術時に採取したヒト変性椎間板を材料として検討中であるが、年齢、病態、変性の程度などにぱらつきが非常に多く、まだ一定の結果を得ていない。そこで同時並行して、ラットを用いて以下の実験を行ない、椎間板変性のメカニズムを解明している。
方法)Wisterラット25匹を用いた、透視下に第5,7尾椎の中心にそれぞれ直径0.8mmの鋼線を2本ずつ直交させて刺入し、鋼線間に4本のバネを設置することにより、持続的な圧迫力を第5/6,6/7尾椎椎間板に負荷させた。圧縮負荷は、0.2Mpa負荷したものをA群、0.4Mpa負荷したものをB群、鋼線を刺入しただけのものをsham群としそれらを一ヶ月間飼育した。途中脱落したものを省き、最終的にA群6匹、B群7匹、Sham群5匹となった。屠殺後に尾椎を摘出し、固定脱灰しパラフィン包埋後に、変性の程度を評価する目的でHEおよびAlu染色により椎間板細胞の形態、細胞数を計測した。次にTUNEL法によりアポトーシス細胞数を計数し、さらにMMP2,3,MT1-MMPに対するモノクローナル抗体を用いた免疫染色を行い、染色陽性細胞率を計算し、それら発現の局在について椎間板を髄核中心、髄核辺縁、繊維輪内層、繊維輪外層の4区画に分けて検討した。
結果および考察)光顕的観察にて、A群、B群共にsham群と比較し、髄核細胞数の減少、基質の減少などの変性所見が観察され、圧縮負荷が強いほどこれら変性所見が顕著であった。TUNEL陽性細胞は髄核中心部に認め、負荷依存性に増加していた。一方MMPsではMMP-2、MT1-MMPがsham群に比較し、髄核辺縁部において発現が亢進していた。しかしA、B群間に明らかな差は認められなかった。MMP-3はいずれの群においてもほとんど認められなかった。これらの結果より、椎間板変性にアポトーシスおよびMMP-2、MT1-MMPが関与していることが示唆された。
|
