本研究に先立ち、HIV-1 mRNAに対するin situ hybridization法を用いて、HIV腎症を発症した患者の腎上皮細胞にHIV-1ウイルスが感染していることを示すとともに、conventional PCR法により、同じ患者のパラフィン包埋した腎組織にenvelop DNAや環状DNAを検出した。これらの結果は、腎上皮細胞がHIV-1複製に先んじて、HIV-1ウィルスのリザーバーとして機能する可能性を示唆している。今回、ヒト腎臓におけるHIV-1 DNAの感染部位の同定のための一つの方法として、in situ PCR法の確立を行った。 方法論に関しては、研究実施計画に記載した通りである。 HIV-1 transgenic mouseより摘出した腎臓をパラフィン包埋し、in situ PCRの条件設定を行った。この腎組織では、全ての上皮細胞にHIV-1 DNAが組み込まれており、適切な陽性コントロールになると考えた。現に尿細管上皮細胞におけるHlV-1 RNAの発現が、in situ hybridization去によって確認されている。今回用いたin situ PCRでは、尿細管上皮細胞のみならず、全ての上皮細胞の核が濃染された。またhouse keeping geneのβ-globin DNAを検出するプライマーを用いた陽性コントロールでは、腎切片上に存在する全ての細胞が陽性を示した。 さらに陰性コントロールとして用いた組織(Taq polymeraseの非使用、血清HIV-1ウイルス陰性症例の腎生検組織、非ヒト由来のDNAを増幅するprimersの使用)では全ての細胞で陰性であった。
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