遺伝子発現リアルタイムモニターシステムの開発

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13780637
• 研究種目: 奨励研究(A)
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 山口 瞬 神戸大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (70304087)
• キーワード: 時計遺伝子 / 体内時計 / 概日リズム / トランスジェニックマウス

研究概要

生きたままのマウスの脳で遺伝子の発現をリアルタイムに観察することを目的にc-fosプロモーターに短時間半減期型のGFPをつないだトランスジェニックマウスの作成を行ってきた。c-fosプロモーターは本来のc-fosと同様の発現をすることが知られている、約7.8Kbの領域を用いた。GFPは生体内で約2時間の半減期と考えられているものを使用した。マウスの受精卵にマイクロインジェクション法でDNAを注入し、トランスジェニックマウスを作成した。既に、5ライン以上を確立し、それぞれのラインのマウスを用いて解析を行っている。夜間、マウスに光を30分照射し、照射後30分後にマウスの脳を取り出し、視交叉上核でのGFP mRNAの発現をin situ hybridizationにより解析した。その結果、全てのラインで、光照射により、視交叉上核に著明なGFP mRNAの誘導を認めた。さらにそのうちの1ラインについては、蛍光顕微鏡による観察で視交叉上核の神経細胞の細胞体が蛍光を発することを確認した。今後これらのマウスを用いて、視交叉上核に光ファイバーを挿入し、生きたマウスで発光を計測することで、遺伝子発現をリアルタイムに観測する。また、Cry1/Cry2ダブルノックアウトマウス、Clockミュータントマウスなどのリズム異常マウスとかけあわせることで、これらのマウスにおけるc-fos遺伝子の反応性を解析する。

研究成果

• [文献書誌] Mitsui S. et al.: "Antagonistic role of E4BP4 and PAR proteins in the circadian oscillatory mechanism"Genes Dev.. 15. 995-1006 (2001)
• [文献書誌] Nishiyama K. et al.: "Tyrosine hydroxylase and NADPH-diaphorase in the rat nodose ganglion : colocalization and central projection"Acta Histochem Cytochem.. 34(2). 135-141 (2001)
• [文献書誌] Ishida Y. et al.: "Constitutive expression and delayed light response of casein kinase I epsilon and I delta mRNAs in the mouse suprachiasmatic nucleus"J Neurosci Res.. 64(6). 612-616 (2001)
• [文献書誌] Asai M.et al.: "Visualization of mPer1 transcription in vitro : NMDA induces a rapid phase shift of mPer1 gene in cultured SCN"Current Biol.. 11(19). 1524-1527 (2001)
• [文献書誌] Taguchi K. et al.: "Different circadian expression profiles of clock genes in the mouse suprachiasmatic nucleus"Biomed Res.. 22(3). 125-131 (2001)
• [文献書誌] 山口瞬: "哺乳類時計遺伝子の転写制御"細胞工学. 20(6). 811-816 (2001)
• [文献書誌] 岡村均 他: "実地診療に役立つヒトのリズム 時間診療学"永井書店. 268 (2001)