内皮細胞分と血管形成における転写因子VEZF1の役割

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13832001
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 安部 まゆみ 東北大学, 加齢医学研究所, 助手 (80271980)
• 研究分担者: 佐藤 靖史 東北大学, 加齢医学研究所, 教授 (50178779)
• キーワード: 血管形成 / 血管新生 / 転写因子 / ES細胞 / 分化 / VEZF

研究概要

1.未分化状態を維持した系(LIF存在下でゼラチンコートディッシュ上に培養)でのES細胞株(MG1.19)には既にVEZF1が発現していることがRT-PCR、ウエスターンブロットで確認された。
2.EGFPを遺伝子発現のモニターにしたVEZF発現ベクター(VEZF1/IRES/EGFP)をMG1.19細胞を利用したスーパートランスフェクション法でES細胞株に導入した。
3.我々は当初コントロールとしてIRES/EGFPをES細胞用発現ベクターpHPCAGに導入して作製したものをMockとして用いたが、EGFPの発現が見られなかったため、EGFPの部分のみを導入したものをMockとして用いた。
4.EGFPの発現はMock、VEZF1S(センス)、VEZF1AS(アンチセンス)の各細胞株で確認されたが、RT-PCR、ウエスターンブロットを用いて検討したmRNA、蛋白の発現レベルではこれら3種の細胞株に差異はなかった。
5.さらにLIF非存在下でOP9上に培養する分化系に移しても、内皮前駆細胞のマーカーの一つであるVEGFR2の発現に有意の差は見られなかった。
6.我々はVEZF1が血管内皮細胞の増殖・遊走・ネットワーク形成に重要であることをin vitro並びにin vivoの系で見出したが(投稿準備中)、VEZF1が内皮細胞の分化にも関与するか否かについては、ASベクターによるVEZFの発現抑制の失敗により、確認できなかった。
7.今後はsiRNAによる発現抑制を試みる予定である。

研究成果

• [文献書誌] Abe M., Inoue D., Matsunaga K., Ohizumi Y., Ueda H., Asano T., Murakami M., Sato Y.: "Goniodomin A, an antifungal polyether macrolide, exhibits antiangiogenic activities via inhibiting actin reorganization of endothelial cells"J.Cell.Physiol.. 190. 109-116 (2002)
• [文献書誌] Abe M., Oda N., Shibata K., Yamasaki M., Sato Y.: "Augmented binding and activation of latent transforming growth factor-β by a tryptic fragment of latency associated peptide"Endothelium. 9. 25-36 (2002)
• [文献書誌] Nakagawa T., Abe M., Yamazaki T., Miyashita H., Niwa H., Kokubun S., Sato Y.: "HEX acts as a negative regulator of angiogenesis by modulating the expression of angiogenesis-related gene in endothelial cells in vitro"Arterioscl.Thromb.Vasc.Biol.. 23. 231-237 (2003)