心筋への遺伝子導入による新しい心不全治療法の開発

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13832002
• 研究機関: 群馬大学
• 研究代表者: 新井 昌史 群馬大学, 医学部, 講師 (60270857)
• 研究分担者: 倉林 正彦 群馬大学, 医学部, 教授 (00215047)
• キーワード: 心筋小胞体 / Ca^<2+>-ATPase / phospholamban / 遺伝子治療 / アデノ随伴ウイルス / レンチウイルス / 心不全 / ベクター

研究概要

研究初年度は不全心筋に導入する遺伝子ベクターの構築を行った。
導入遺伝子とベクターの構築:
アデノ随伴ウイルス(AAV)ベクター;1)SERCA2:心筋特異的発現を得られるようにhuman ANP gene promoterのcardiac-specific elementをhuman SR Ca^<2+>-ATPase遺伝子と連結したものを用いた。これをAvigen社ベクターシステムのAAV type5のベクター系に挿入し、ウイルスベクター粒子の産生を行った。2)Anti-sense phospholamban:同様にhuman ANP gene promoter-1200bpをanti-sense方向に配列させたhuman phosholamban cDNAと結合させ、AAV産生plasmidであるpTR-UF5に組み込んだ。これをhelper plasmidであるpSuper3とともに、293T細胞に導入し、Anti-sense Phospholamban cDNAの発現をさせる予定である。
レンチウイルスベクター系:SERCA2 : human ANP gene promoter-1200bpをfull length human SERCA2 cDNAと接合させた遺伝子をCS-CDF-CG-PRE(vector plasmid)に組み込んだ後、pCMVdeltaR8.2(packaging plasmid)とpMDG(envelope-coding plasmid)とともに293細胞に遺伝子導入し、vector virusを産生させた。このシステムの有効性は、SERCA2の代わりにGFP遺伝子を入れたvector系で確認し、心筋特異的に発現することを確認した。
これらベクターを培養心筋細胞ならびにラット心筋に導入し、心機能特性を検討する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Watanabe A.: "Retinoids induce the PAI-1 gene expression through tyrosine kinase-dependent pathways in vaseular smooth muscle cells"J Cardiovasc Pharmacol. 39(印刷中). (2002)
• [文献書誌] Hatori T.: "Stress Thallium-201 myocardial scintigraphy in patients with complete occlusion of the left main coronary artery"CHEST. 120. 1409-1412 (2001)
• [文献書誌] Watanabe A.: "Combined effect of retinoic acid and basic FGF on PAI-1 gene expression in vascular smooth muscle cells"Cardiovasc Res. 51. 151-159 (2001)
• [文献書誌] Isobe Z.: "Recurrent pyogenic vertebral osteomyelitis associated with Type2 diabets mellitus"J International Med Res. 29. 445-450 (2001)
• [文献書誌] 新井昌史: "分子生物学(Ca^<2+>ハンドリング、カルシユッーリンシグナリング)からみた心不全"臨床医. (印刷中). (2002)
• [文献書誌] 新井昌史: "心不全の遺伝子治療"現代医療. 34. 2-7 (2002)
• [文献書誌] 新井昌史: "薬剤性心筋障害と酸化ストレス"Cardiac Practice. 12. 403-409 (2001)
• [文献書誌] 新井昌史: "小胞体Ca-ATPase発現量と心機能"Clinical Calcium. 11. 733-742 (2001)
• [文献書誌] 新井昌史: "Ca-ATPaseの遺伝子発現調節機構"Clinical Calcium. 11. 436-444 (2001)