2001 年度実績報告書

心筋虚血時に放出される細胞内シグナル活性化因子の解明

研究課題

研究課題/領域番号	13832005
研究機関	山口大学
研究代表者	水上洋一山口大学, 医学部, 助教授 (80274158)
研究分担者	小林誠山口大学, 医学部, 教授 (80225515)
キーワード	心臓 / 虚血 / 細胞外シグナル伝達 / 分泌因子
研究概要	臨床の現場においても心血管造影を行うと心筋梗塞部位では血管新生によって心機能が維持されていることが極めて多い。しかし、血管新生が行われない心筋では梗塞周囲にアポトーシスが多発し、やがて心臓自身の機能が損なわれ、心不全を引き起こす症例が多発している。そこで、細胞レベルでの心筋虚血モデルを用いて心筋培養上清100リットルから各種カラムを用いて精製し、心筋虚血時に分泌される細胞内シグナル活性化因子を精製した。方法は、細胞を虚血再灌流刺激を行い、その培養上清を硫酸アンモニウムで処理した後、遠心分離を行い分泌タンパク質を濃縮した。その後、透析したのち、アフィニテイーカラム、イオン交換カラムでタンパク質を分離した。各分画をMTT法でアッセイし、細胞死抑制因子を精製した。心筋虚血再灌流によって分泌されたタンパク質を濃縮した後、ヘパリンカラムで精製した。その結果、2つ分画から細胞死抑制活性が検出された。このうち低塩濃度で溶出した分画をさらに陰イオン交換カラムにかけ、2つの分画から細胞死抑制活性が検出された。これらのタンパク質はいずれも単一なタンパク質に分離されており、その分子量は33kDaおよび41kDaであった。現在これらの因子のアミノ酸シークエンスを行っている。飛行時間型質量分析計によるペプチドマップの結果からいずれも新規蛋白質であると予想されている。今回の実験結果では心筋虚血再灌流時には低分量から高分子量まで多くのタンパク質が分泌されていた。これらのタンパク質のなかには強力な収縮活性を持つ因子や神経細胞特異的に凝集を引き起こす因子が含まれており、これらの因子の解明は心筋虚血の病態理解と治療薬の開発に大きな役割を果たすことが予想される。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Fujimoto, K. et al.: "Molecular cloning of rat transmembrane domain 40-kDa regulated in adipocytes and its expression in H9c2 cells exposed to ischemic hypoxia and reoxygenation"Biochim. Biophys. Acta. (Gene Structure & Expression). 1518. 173-177 (2001)
[文献書誌] Omura, M. et al.: "Eicosapentaenoic acid (EPA) induces Ca2+-independent activation and translocation of endothelial nitric oxide synthase and endothelium-dependent relaxation"FEBS Lett.. 487. 361-366 (2001)
[文献書誌] Kimura, M. et al.: "G-protein-coupled receptor, GPR41,induces apoptosis via a p53/Bax pathway during ischemic hypoxia and reoxygenation,"J. Biol. Chem.. 276. 26453-26460 (2001)
[文献書誌] Mizukami, Y. et al.: "Phosphorylation of proteins and apoptosis induced by c-Jun N-terminal kinase activation in H2O2 stimulation"Biochim. Biophys. Acta. (Molecular Cell Research). 1540. 213-220 (2001)
[文献書誌] Aki, T.et al.: "Phosphatidylinositol 3-kinase accelerates necrotic cell death during hypoxia"Biochem. J.. 358. 481-487 (2001)
[文献書誌] Mizukami, Y. et al.: "Dietry iron reduces anti-convulsion activity of phenytoin in electrconvulsion via inhibition of brain penetration"Brain Res.. 915. 112-117 (2001)

2001 年度 実績報告書

心筋虚血時に放出される細胞内シグナル活性化因子の解明

研究代表者

水上 洋一 山口大学, 医学部, 助教授 (80274158)

研究成果

[文献書誌] Fujimoto, K. et al.: "Molecular cloning of rat transmembrane domain 40-kDa regulated in adipocytes and its expression in H9c2 cells exposed to ischemic hypoxia and reoxygenation"Biochim. Biophys. Acta. (Gene Structure & Expression). 1518. 173-177 (2001)

[文献書誌] Omura, M. et al.: "Eicosapentaenoic acid (EPA) induces Ca2+-independent activation and translocation of endothelial nitric oxide synthase and endothelium-dependent relaxation"FEBS Lett.. 487. 361-366 (2001)

[文献書誌] Kimura, M. et al.: "G-protein-coupled receptor, GPR41,induces apoptosis via a p53/Bax pathway during ischemic hypoxia and reoxygenation,"J. Biol. Chem.. 276. 26453-26460 (2001)

[文献書誌] Mizukami, Y. et al.: "Phosphorylation of proteins and apoptosis induced by c-Jun N-terminal kinase activation in H2O2 stimulation"Biochim. Biophys. Acta. (Molecular Cell Research). 1540. 213-220 (2001)

[文献書誌] Aki, T.et al.: "Phosphatidylinositol 3-kinase accelerates necrotic cell death during hypoxia"Biochem. J.. 358. 481-487 (2001)

[文献書誌] Mizukami, Y. et al.: "Dietry iron reduces anti-convulsion activity of phenytoin in electrconvulsion via inhibition of brain penetration"Brain Res.. 915. 112-117 (2001)

2001 年度実績報告書

水上洋一山口大学, 医学部, 助教授 (80274158)