| 研究概要 |
関節リウマチ(RA)のモデル動物においてサイクリン依存性キナーゼインヒビター(CDKI)p16^<INK4a>細胞周期制御療法は関節炎に著効し、滑膜組織特異的なp16^<INK4a>発現誘導はRAの治療の一つの鍵になりうると考えられる。RA滑膜由来滑膜線維芽細胞(RSF)においては放射線照射、高密度培養、低血清培地などの細胞増殖を抑制するような条件におくとp16^<INK4a>が発現誘導されやすいが、その機構は不明である。同じ条件においては、CDKIのp21^<Cipl>も発現誘導されたが、RSF以外の線維芽細胞においても発現誘導された。そこで、RSFにおけるp16^<INK4a>の発現機構を解析した。
【方法】RSFにp21^<Cipl>アデノウイルスもしくは挿入遺伝子のないコントロールアデノウイルスを感染させた。その後、経時的にサンプル調製し、RT-PCR, western blot,蛍光デイファレンシャルデイスプレイ(FDD)、Gene Chip(Affimetrix社)などを行った。
【結果】RSFにp21を強制発現させると、p16の発現誘導を認めた。このp21によるp16発現誘導は変形性関節症由来滑膜線維芽細胞やWI-38などの培養線維芽細胞株では認めなかった。また、活性型Rasの強制発現や細胞老化などによるp16発現に関与することが既に知られているERK, Ets-1,Ets-2,Id-1,Sp-1などやp16プロモーターのメチル化、アセチル化などの明らかな関与は認められなかった。そこで、p16の発現誘導に関与する未知の遺伝子を探索するため、FDD法やGeneChip解析を行うと、p16が誘導されたRSF特異的に発現が変化した遺伝子群を認めた。
【結語】これらの遺伝子がp21によるRSF特異的なp16発現誘導に関与し、RA治療の新しい標的遺伝子となる可能性がある。
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