2002 年度実績報告書

葉緑体in vitro RNAエディティング・翻訳共役系の確立

研究課題

研究課題/領域番号	13874111
研究機関	名古屋市立大学
研究代表者	杉浦昌弘名古屋市立大学, 大学院・システム自然科学研究科, 教授 (80027044)
研究分担者	谷本英一名古屋市立大学, 大学院・システム自然科学研究科, 教授 (90080283)
キーワード	葉緑体 / in vitro系 / RNAエディティング / 翻訳 / mRNA / タバコ
研究概要	1.In vitro翻訳系の改良葉緑体の大量単離法を再検討して、単離葉緑体の砕壊と活性画分の抽出法を改良した。従来は放射性S35標織メチオニンを用いる活性測定法であったが、煩雑なため非アイソトープで活性測定する系を開発した。蛍光指標リジンtRNAおよび自家蛍光を持つタンパク質であるEGFPを用いる方法を高活性で反応産物を検出可能となった。 2.In vitro RNAエディティング系の改良タバコ葉緑体のpsbL mRNAは、エディティングによりACGからAUG翻訳開始コドンが生成して翻訳可能となる。ACGを持つpre-mRNAを基質として、現有のin vitro RNAエディティング系を改良し、より活性が高く反応が持続する系を得た。これを用いてpsbE mRNAとpetB mRNAのRNAエディティングの解析を行った。psbE mRNAのシス配列として上流-20から-6の領域を同定した。さらに、これに結合するトランス因子として56kDaのタンパク質とUVクロスリンク法で検出した。 3.In vitro系に適した植物種の探索タバコ以外で、in vitro系の調製が容易で高活性な植物種を探す。エンドウ葉緑体より、in vitroエディティング系の開発に成功した。これを用いてpetB mRNAの解析を行った。エンドウ芽生は生育が容易で葉緑体の単離も比較的簡単であったが、葉緑体抽出液のRNA分解活性がタバコに比べて非常に高かった。

研究成果

(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Miyamoto, T.: "Recognition of RNA editing sites is directed by unique proteins in chloroplasts"Mol. Cell. Biol.. 22. 6726-6734 (2002)
[文献書誌] Hasegawa, K.: "Organization and transcription of the gene family encoding chlorophyll a/b-binding proteins in Nicotiana sylvestris"Gene. 289. 161-168 (2002)
[文献書誌] Mathieu, O.: "5S rRNA genes expression is not inhibited by DNA methylation in Arabidopsis"Plant Journal. 29. 313-323 (2002)
[文献書誌] Hasegawa, K.: "In vitro analysis of transcription initiation and termination from the Lhcb1 gene family in Nicotiana sylvestris"Plant Journal. 33. 1063-1072 (2003)
[文献書誌] Sasaki, T.: "Identification of RNA sites in chloroplasts transcripts from the maternal and paternal progenitors of tobacco(Nicotiana tabacum)"Mol. Biol. Evol.. (2003)
[文献書誌] Plader, W.: "The Shine-Dalgarno-like sequence is a negative regulatory element for translation of tobacco chloroplast rps2 mRNA"Plant Journal. (2003)
[文献書誌] 杉浦昌弘: "生体の科学第53巻(2号)p124-130 「RNAエディティングに関与するタンパク-クロロプラストの例"医学書院. (2002)

2002 年度 実績報告書

葉緑体in vitro RNAエディティング・翻訳共役系の確立

研究代表者

杉浦 昌弘 名古屋市立大学, 大学院・システム自然科学研究科, 教授 (80027044)

研究成果

[文献書誌] Miyamoto, T.: "Recognition of RNA editing sites is directed by unique proteins in chloroplasts"Mol. Cell. Biol.. 22. 6726-6734 (2002)

[文献書誌] Hasegawa, K.: "Organization and transcription of the gene family encoding chlorophyll a/b-binding proteins in Nicotiana sylvestris"Gene. 289. 161-168 (2002)

[文献書誌] Mathieu, O.: "5S rRNA genes expression is not inhibited by DNA methylation in Arabidopsis"Plant Journal. 29. 313-323 (2002)

[文献書誌] Hasegawa, K.: "In vitro analysis of transcription initiation and termination from the Lhcb1 gene family in Nicotiana sylvestris"Plant Journal. 33. 1063-1072 (2003)

[文献書誌] Sasaki, T.: "Identification of RNA sites in chloroplasts transcripts from the maternal and paternal progenitors of tobacco(Nicotiana tabacum)"Mol. Biol. Evol.. (2003)

[文献書誌] Plader, W.: "The Shine-Dalgarno-like sequence is a negative regulatory element for translation of tobacco chloroplast rps2 mRNA"Plant Journal. (2003)

[文献書誌] 杉浦昌弘: "生体の科学 第53巻(2号)p124-130 「RNAエディティングに関与するタンパク-クロロプラストの例"医学書院. (2002)

2002 年度実績報告書

杉浦昌弘名古屋市立大学, 大学院・システム自然科学研究科, 教授 (80027044)

[文献書誌] 杉浦昌弘: "生体の科学第53巻(2号)p124-130 「RNAエディティングに関与するタンパク-クロロプラストの例"医学書院. (2002)