p53標的遺伝子群の転写活性化を指標にした消化器癌の抗癌剤感受性の検索

2001 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 13877030
• 研究種目: 萌芽的研究
• 研究機関: 獨協医科大学
• 研究代表者: 藤盛 孝博 獨協医科大学, 医学部, 教授 (30095385)
• 研究分担者: 川又 均 獨協医科大学, 医学部, 助教授 (70224847)
• キーワード: 消化器癌 / p53 / p21waf1 / BAX / MDM2 / 抗癌剤 / 転写調整 / ルシフェラーゼアッセイ

研究概要

食道癌,胃癌,大腸癌の生検材料あるいは手術材料の腫瘍部から初代培養を行った.生検の場合は組織のごく一部(0.5mm^3程度)を組織診断の障害とならないように切除し,培養を開始し,組織学的にほとんどが腫瘍でしめられていた部分からの培養細胞を解析に使用した.手術材料からは肉眼的に腫瘍と診断できる部位から組織を切除し,培養を開始し,組織学的に腫瘍の存在が確認されてから解析に使用した.トランスフェクションアッセイのために初代培養した細胞を6ウェルプレート(35mm径)に播種し,細胞がサブコンフルエント(5x10^5個)になった状態で,レポーター遺伝子を導入した.使用したレポーターは(p21waf1,BAX, MDM2)のプロモーターを含み,ルシフェラーゼ遺伝子をその下流に持つプラスミドである.それらのレポータープラスミドを上記の条件で初代培養細胞にトランスフェクションし,12時間後に抗癌剤処理を開始した.抗癌剤はシスプラチンと5-FUを使用した.抗癌剤処理後12時間で細胞を回収し,ルシフェラーゼ活性を測定した.それぞれの抗癌剤で誘導される標的遺伝子の種類,程度によりp53経路を介した抗癌剤の感受性を評価した.癌により,抗癌剤により全くp53標的遺伝子の活性化が見られないもの,特定の標的のみ活性化されるものが存在することが明らかになった.現在,p53標的遺伝子でアポトーシス誘導に極めて関与が深いと考えられているP53AIP1,PUMA遺伝子プロモーターをクローニングし,レポータープラスミドを作成している.

研究成果

• [文献書誌] Fujimori T, Kawamata H, Ichikawa K, Ono Y, Okura Y, Tomita S, Imura J.: "Pathological issues of gastric and lower esophageal cancer ; Helicobacter pylori infection and its eradication"Journal of Gastroenterology. (in press). (2002)
• [文献書誌] Tomita S, Kawamata H, Imura J, Omotehara F, Ueda Y, Fujimori T.: "Frequent polym or orphim of PPARγ(Peroxisome Proliferator Activated Receptor γ)gene in colorectal cancer containing wild type K-ras gene"International Journal of Molecular Medicine. (in press). (2002)
• [文献書誌] Fujii S, Fujimori T, Kashida H.: "UC-associated neoplasia"Pathology International. (in press). (2002)
• [文献書誌] Furihata T, Kawamata H, Kubota K, Fujimori T.: "Evaluation of the Malignant Potential of Aberrant Crypt Foci by Immunohistochemical Staining for β -catenin in Inflammation-Induced Rat Colon Carcinogenesis"International Journal of Molecular Medicine. (in press). (2002)
• [文献書誌] Ichikawa K, Imura J, Kawamata H, Takeda J, Fujimori T.: "Down-regulated p16 Expression Predicts Poor Prognosis in Patients with Extrahepatic Biliary Tract Carcinomas"International Journal of Oncology. 20(3). 453-461 (2002)
• [文献書誌] Kaihara T, Kusaka T, Kawamata H, Oda Y, Fujii S, Morita K, Imura J, Fujimori T.: "Decreased Expression of E-cadherin and Yamamoto-Kohama's Mode of Invasion highly Correlates with Lymph Node Metastasis in Esophageal Squamous Cell Carcinoma"Pathobiology. 69(3). 172-178 (2002)
• [文献書誌] Hino S, Kawamata H, et al.: "TSC-22(transforming growth factor--stimulated clone-22)enhances the radiation-sensitivity of salivary gland cancer cells"Biochemical and Biophysical Research Communications. (in press). (2002)
• [文献書誌] Hino S, Kawamata H, et al.: "Leucine zipper structure of TSC-22(TGF-beta stimulated clone-22)markedly inhibits the anchorage-independent growth of salivary gland cancer cells"Oncology Report. 9(2). 371-374 (2002)
• [文献書誌] M.O.Hoque, Kawamata H, et al.: "Dihydropyrimidne dehydrogenase mRNA level correlates with the response to 5-Fluorouracil-based chemo-immuno-radiation therapy in human oral squamous cell cancer."International Journal of Oncology. 19(5). 953-958 (2001)
• [文献書誌] Uchida D, Kawamata H, et al.: "Low-dose retinoic acid enhances in vitro invasiveness of human oral sqnamous-cell-carcinoma cell lines"British Journal of Cancer. 85(1). 122-128 (2001)
• [文献書誌] Uchida D, Kawamata H, et al.: "Role of HGF/c-met system in invasion and metastasis of oral squamous cell carcinoma cells in vitro and its clinical significance"International Journal of Cancer. 93(4). 489-496 (2001)
• [文献書誌] Furihata T, Sakai T, Kawamata H, et al.: "A new in vivo model for studying invasion and metastasis of esophageal squamous cell carcinoma"International Journal of Oncology. 19(5). 903-907 (2001)