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1.マウス(C57BL/6)を用いて体外受精により、前核期凍結受精卵を1800個作製した。前核期受精卵は媒精開始から約5-7時間内に選別して、直ちに凍結保存を行った。
2.前核期凍結受精卵を融解後、cTnT1およびcTnT2遺伝子を常法に従い、それぞれ雄性前核内にインジェクションして、それぞれの遺伝子導入受精卵200個を仮親マウスの卵管内に移植した。その後、cTnT1およびcTnT2遺伝子導入受精卵からそれぞれ12匹、24匹のマウスが得られ、genotypingの結果、それぞれ2匹、1匹のトランスジェニックマウスが得られた。現在、得られたトランスジェニツクマウス(3匹)のF1マウスの作製を行って、導入遺伝子の子孫への伝達を調べている。
3.1の体外受精により作製された前核期受精卵を用いて、媒精から7時間後の雄性前核内に、cTnT1およびcTnT2遺伝子をそれぞれインジェクションして、それぞれ400個の遺伝子導入受精卵を作製した。その後、cTnT1およびcTnT2遺伝子導入受精卵をそれぞれ200個づつに分けて、1)cTnT1およびcTnT2遺伝子導入受精卵の各200個を仮親マウスの卵管内に移植して、それぞれ29匹、14匹のマウスが得られた。現在、得られたマウスのgenotypingを行っている。
2)残りのcTnT1およびcTnT2遺伝子導入受精卵の各200個は、直ちに凍結保存を行った。2週問後にcTnT1およびcTnT2遺伝子導入凍結受精卵を融解して、それぞれ仮親マウスに移植して、20匹、33匹のマウスが得られた。現在得られたマウスのgenotypingを行っている。
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