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本研究は、Transforming growth factor (TGF)-βによる腫瘍形成・悪性化における転写調節機構の解明を目的とし、以下の検討を行った。初年度までに、TGF-β誘導性新規lincRNAがTGF-βの抗アポトーシス作用を増強し、癌の悪性化に寄与している可能性を見出していた。
初年度の予備実験より、TGF-β誘導性新規lincRNAは、TGF-βによりEpithelial-mesenchymal transition (EMT：上皮間葉移行)が誘導される細胞において高発現していることが明らかになった。そのため、TGF-β誘導性新規lincRNAのEMTに対する影響を評価するために、TGF-β誘導性新規lincRNAが高発現しているマウス乳腺上皮細胞NMuMG細胞において、siRNAを用いてTGF-β誘導性新規lincRNAをノックダウンした。定量的RT-PCRおよびwestern blottingにより各種上皮マーカーや間葉系マーカーの発現変動を検討した結果、TGF-β誘導性新規lincRNAノックダウン群とコントロール群において顕著な差は認められなかった。また、phallodin染色によりアクチンストレスファイバーの形成を評価したところ、TGF-β誘導性新規lincRNAノックダウン群とコントロール群との差は観察されなかった。これまでの実験結果を論文としてまとめ、投稿・アクセプトされた。
TGF-β誘導性新規lincRNAのEMTに対する影響の評価の一環として、クロマチンの開閉の状態をTGF-β誘導性EMTの獲得前後で検討することにより、転写因子などのクロマチン作用部位、構造変化などの解析を試みた。その結果、TGF-β誘導性EMT獲得前後における各種EMT関連因子のクロマチン開閉変化や制御機構を見出した。現在論文としてまとめ、投稿準備中である。
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