| 研究概要 |
N結合型糖鎖は真核生物において重要な生理的機能を担っており、糖鎖プロセシングの最初にはたらく酵素としてプロセシングα-グルコシダーゼIが知られている。一方、真正細菌は真核生物型の糖鎖を産生しないが、本酵素と同じ糖質加水分解酵素ファミリー63(GH63)に属する機能未知タンパク質の遺伝子が真正細菌においても見出されている。本研究では、真正細菌由来GH63タンパク質および真核生物プロセシングα-グルコシダーゼIの構造機能相関の解明および、それらを利用した新規なオリゴ糖の作出やN結吉合型糖鎖の部分的合成を目的とした。
大腸菌由来GH63酵素YgjKをグライコシンターゼ変異体E727Aと合成したオリゴ糖Glcα-1,2-Galとの複合体構造解析により、Glcα-1,2-GalがYgjKの活性部位に結合すると複数のアミノ酸残基の構造が変化し、触媒ドメインが閉じる構造をとることがわかった。野生型酵素はGlcα-1,2-Ga1を加水分解することから、YgjKは天然においてコラーゲンなどに見出される糖鎖構造であるGlcα-1,2-Ga1を分解する酵素である可能性が考えられた。本成果はFEBS Journalにおいて発表した。また、触媒残基を他のアミノ酸に置換しグライコシンターゼ活性を獲得した変異体を新たに作製した。
糸状菌Aspergillus basiliensis ATCC 9642由来プロセシングα-グルコシダーゼI(AbPGI)のX線結晶構造解析を行うため、Hisタグ融合タンパク質として大腸菌を用いて発現させた。精製した酵素を用いて結晶化条件のスクリーニングを行ったところ、単結晶を得ることに成功した。高エネルギー加速器研究機構の放射光科学研究施設にてX線回折強度測定を行った結果、3.4Å分解能の回折データを得た。
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