| 研究実績の概要 |
本研究では、ﾏｸﾛﾌｧｰｼﾞから破骨細胞への分化過程において、mRNAﾚﾍﾞﾙが発現上昇する遺伝子の１つとしてRab27Aを同定し、破骨細胞におけるLROs形成とその他の機能に関する解析を行った。DNAﾏｲｸﾛｱﾚｰ解析を行い、破骨細胞分化過程で発現ﾚﾍﾞﾙが上昇する遺伝子としてRab27A遺伝子を同定した。RANKL刺激して破骨細胞分化を誘導すると、Rab27AをﾉｯｸﾀﾞｳﾝしたRAW-D細胞ではｺﾝﾄﾛｰﾙに比べ、細胞の多核化と巨大化を示した。同様に、Rab27A遺伝子変異を持つAshenﾏｳｽ由来のﾏｸﾛﾌｧｰｼﾞを培養すると、多核化と巨大化が観察された。破骨細胞のﾏｰｶｰ遺伝子の発現ﾚﾍﾞﾙを比較すると、野生型に比べてAshen破骨細胞では種々のそれが有意に上昇していた。Ashen破骨細胞が多核化と巨大化される分子ﾒｶﾆｽﾞﾑとして、同細胞では受容体の輸送異常とその下流ｼｸﾞﾅﾙの増強が観察された。Ashen破骨細胞では、M-CSFとRANKL刺激に対して、Erk、p38、Aktのﾘﾝ酸化ﾚﾍﾞﾙが上昇した。さらに、FACS解析により、M-CSFの受容体であるc-fmsの細胞膜の発現レベルがAshen破骨細胞では高くなることが分かった。またRANKLの受容体であるRANKは受容体のﾀﾞｳﾝﾚｷﾞｭﾚｰｼｮﾝが異常になっており、細胞内に長く留まっていた。Ashen破骨細胞では、細胞内で形成されるLROsの輸送が異常になっていた。野生型とAshen破骨細胞を比較すると、Ashen破骨細胞では、骨吸収に重要なactin ringの形成が異常になっており、ﾘｿｿｰﾑﾀﾝﾊﾟｸ質であるLAMP2、あるいはｶﾃﾌﾟｼﾝKの局在が異常になっていた。またashen破骨細胞では、種々のﾘｿｿｰﾑﾀﾝﾊﾟｸ質の量が異常になっていることや、骨吸収能が有意に低下していることが分かった。
Shimada-Sugawara M et al.scientific reports,2015.in press.
|
