2002 年度実績報告書

レトロウイルスベクターを用いた養子免疫遺伝子細胞療法の確立

研究課題

研究課題/領域番号	14030008
研究機関	筑波大学
研究代表者	小野寺雅史筑波大学, 臨床医学系, 講師 (10334062)
研究分担者	中内啓光東京大学, 医科学研究所, 教授 (40175485)
キーワード	遺伝子治療 / ウイルス / トランスレーショナルリサーチ / 免疫学 / 癌
研究概要	[目的]レトロウイルスベクターを用いてガン関連遺伝子を導入した造血前駆細胞をサイトカインで樹状細胞(DC)へと分化誘導し、これら感染DCで免疫するか、あるいは末梢血リンパ球と共培養することで効率良く腫瘍特異的細胞傷害性T細胞を樹立する。[方法]当教室で開発したレトロウイルスベクターGCDNsamI/Eにガン抗原ovalbumin(OVA)遺伝子を組込み、水庖性口内炎ウイルス由来のG蛋白質でパッケージしたOVA発現ウイルスを作製し、ウイルス感染にてOVA遺伝子をマウス造血前駆細胞(c-KIT陽性lineage陰性細胞)に導入、最終的にはGM-SCFとIL-4でOVA発現DC(DC/OVA)へと分化誘導させた。[結果]DC/OVAはCD11c、CD40、MHC classII、CD86が強陽性で、サイトカインで細胞数を増加させたことから未処置の骨髄から得られるDCの約17倍のDCを得ることができた。次にDC/OVAの抗原提示能を確認するため、B3Z(OVA拘束性T細胞ハイブリドーマで抗原提示細胞がOVAペプチドをclassI上に提示することで細胞内LacZが活性化する細胞)と共培養したところ、OVA発現胸腺腫(EL-4)と同程度のB3Zの活性化を示した。また、DC/OVAをマウスに免疫したところ、OVA発現腫瘍のみを完全に拒絶し、さらにはマウス血液中に抗OVA抗体も出現した。[考察]以上の結果からウイルスベクターにより高発現したOVAが細胞内でプロセスされ、細胞内抗原としてclassI上で提示されたことが示唆された。また、抗体産生を認めたことから、CD4^+T細胞に対してもOVAペプチドがclassII上で提示された可能性が示唆され、本法は細胞性、液性の両免疫を賦活化できることからヒトCD34陽性造血前駆細胞を用いることでヒト腫瘍細胞に対する有用な養子免疫遺伝子細胞治療となると考えられた。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Suzuki A, et al.: "Modified retrovirus vector system for ex vivo gene therapy for neurological disorders"J Neurochem. 82. 953-960 (2002)
[文献書誌] Osawa M, et al.: "Erythroid expansion mediated by the Gfi-1B zinc finger protein : role in normal hematopoiesis"Blood. 100. 2769-2777 (2002)
[文献書誌] Hirasawa R, et al.: "Essential and Instructive Roles of GATA Factors in Eosinophil Development"J Exp Med. 195. 1379-1386 (2002)
[文献書誌] Iwama A, et al.: "Reciprocal roles for C/EBP and PU.1 transcription factors in Langerhans cell commitment"J Exp Med. 195. 547-558 (2002)
[文献書誌] Otsu M.et al.: "Flow Cytometry Analysis of a denosine Deaminase (ADA) Expression : A Simple and Reliable Tool for the Assessment of ADA-Deficient Patients Before and After Gene Therapy"Hum Gene Ther. 13. 425-432 (2002)
[文献書誌] Suzuki A, et al.: "Clonal identification and characterization of self-renewing pluripotent stem cells in the developing liver"J Cell Biol. 156. 173-184 (2002)
[文献書誌] Onodera M: "Gene delively to manmmalian cells in culture : methods and protocols"Humana Press(in press). (2003)

2002 年度 実績報告書

レトロウイルスベクターを用いた養子免疫遺伝子細胞療法の確立

研究代表者

小野寺 雅史 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (10334062)

研究成果

[文献書誌] Suzuki A, et al.: "Modified retrovirus vector system for ex vivo gene therapy for neurological disorders"J Neurochem. 82. 953-960 (2002)

[文献書誌] Osawa M, et al.: "Erythroid expansion mediated by the Gfi-1B zinc finger protein : role in normal hematopoiesis"Blood. 100. 2769-2777 (2002)

[文献書誌] Hirasawa R, et al.: "Essential and Instructive Roles of GATA Factors in Eosinophil Development"J Exp Med. 195. 1379-1386 (2002)

[文献書誌] Iwama A, et al.: "Reciprocal roles for C/EBP and PU.1 transcription factors in Langerhans cell commitment"J Exp Med. 195. 547-558 (2002)

[文献書誌] Otsu M.et al.: "Flow Cytometry Analysis of a denosine Deaminase (ADA) Expression : A Simple and Reliable Tool for the Assessment of ADA-Deficient Patients Before and After Gene Therapy"Hum Gene Ther. 13. 425-432 (2002)

[文献書誌] Suzuki A, et al.: "Clonal identification and characterization of self-renewing pluripotent stem cells in the developing liver"J Cell Biol. 156. 173-184 (2002)

[文献書誌] Onodera M: "Gene delively to manmmalian cells in culture : methods and protocols"Humana Press(in press). (2003)

2002 年度実績報告書

小野寺雅史筑波大学, 臨床医学系, 講師 (10334062)