環境ホルモン固定化高性能ビーズを用いて同定した生体側レセプターの機能解析

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14042211
• 研究機関: 東京工業大学
• 研究代表者: 片岡 浩介 東京工業大学, フロンティア創造共同研究センター, 助手 (20262074)
• 研究分担者: 和田 忠士 東京工業大学, 大学院・生命理工学研究科, 講師 (60262309)
• キーワード: 内分泌攪乱物質 / ラテックス微粒子 / アフィニティー精製

研究概要

内分泌攪乱物質(Endocrine Disruptors : EDs)は、内分泌系の攪乱作用だけでなく、生体にさまざまな悪影響を与えることが知られている。しかしながら、EDsと核内レセプター群との結合は、疑似エストロゲン作用があるとされている物質ですら、必ずしも充分強いものではない。したがって本研究では、EDsの生体側のレセプターが他に存在するものと考え、これらを単離・同定し、EDsの生体に及ぼす影響とそのメカニズムについて新たな視点を獲得することが目的である。
生体側レセプター分子を精製するために、高性能のラテックス微粒子を担体としたアフィニティー精製法を用いた。フタル酸エステル、アルキルフェノール、アトラジンなどをモデル化合物として選び、これらをラテックス微粒子表面上に固定化し、細胞の粗抽出液からこれらのEDsに特異的に結合する生体側レセプター分子を精製したところ、それぞれのEDsに対して特異的に結合する因子が複数種類ずつ得られることがわかった。これらのおのおのを大量に精製して部分アミノ酸配列を決定することにより、タンパク質を同定した。これらのタンパク質群は、EDsに共通の、あるいはおのおののEDsに固有の作用に関与しているのかもしれない。現在、これらのタンパク質に対応するcDNAを入手し、分子生物学的手法を用いてこれらのタンパク質を組換えタンパク質として発現させ、EDsとの結合の特異性や様式を確認するとともに、これらのタンパク質の機能を調べている。また同時に、これらのタンパク質と、EDsによる攪乱作用との関連を、ひとつひとつ解析していくことで内分泌攪乱物質による生体機能への影響を分子レベルであきらかにすることを試みている。

研究成果

• [文献書誌] K.Kataoka et al.: "MafA is a glucose-regulated and pancreatic beta-cell-specific transcriptional activator for the insulin gene"J.Biol.Chem.. 277. 49903-49910 (2002)
• [文献書誌] T.Nishi et al.: "Spatial redox regulation of a critical cysteine residue of NF-kB in vivo"J.Biol.Chem.. 277. 44548-44556 (2002)
• [文献書誌] C.Sawa et al.: "YEAF1/RYBP and YAF-2 are functionally distinct members of a cofactor family for YY1 and E4TF1/hGABP transcription factors"J.Biol.Chem.. 277. 22484-22490 (2002)
• [文献書誌] Nishimura K, et al.: "4℃ preparation of ferrite nanoparticles having protein molecules immobilized on their surfaces"J.Appl.Phys.. 91. 8555-8556 (2002)
• [文献書誌] K.Kataoka et al.: "Induction of cellular anti-oxidative stress genes through heterodimeric transcription factor Nrf2/Small Maf by ant-irheumatic gold(I) compounds"J.Biol.Chem.. 276. 34074-34081 (2001)
• [文献書誌] K.Kataoka et al.: "Maf and Jun Nuclear oncoproteins share downstream target genes for inducing cell transformation"J.Biol.Chem.. 276. 36849-36856 (2001)