| 研究課題/領域番号 |
14104014
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
和氣 徳夫 九州大学, 生体防御医学研究所, 教授 (50158606)
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| 研究分担者 |
加藤 秀則 九州大学, 大学病院, 講師 (60214392)
加藤 聖子 九州大学, 生体防御医学研究所, 講師 (10253527)
松田 貴雄 九州大学, 大学病院, 助手 (10304825)
有馬 隆博 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (80253532)
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| キーワード | 細胞老化 / proline hydroxylase / NECC1 / 絨毛細胞分化 / エストロゲン受容体α / 分子標的治療 / p21CDKインヒビター / ROS |
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| 研究概要 |
1.1q42領域に存在する細胞老化誘導遺伝子:子宮体癌細胞に老化を誘導するORF12cDNAを単離した。 ORF12はproline hydroxylase活性を有し、 HIF-1αを水酸化する事によりVHLによるHIF-1α蛋白分解を亢進することが判明した。ORF12cDNAを子宮体癌細胞へ遺伝子導入すると細胞老化が誘導された。30%を越える子宮体癌組織及び細胞株でORF12遺伝子変異が検出され、同遺伝子が存在する領域にLOHも観察された。
2.絨毛癌細胞に分化プログラムを再構築するNECC1/HOP遺伝子:NECC1-/-胎盤を用いて解析した結果、 NECC1はE8.5-10.5胎盤でのみ一時的に発現し、巨細胞への分化を負に、海綿層細胞への分化を正に制御する事か示唆された。NECC1はSRFと結合し、SRF転写因子の機能を負に制御する事により分化制御に関わる。ラットRCHO-1細胞(トロホブラスト幹細胞としての性格を有する)に分化刺激を与えた場合も一時的発現パターンを示す。ドミナント・ネガティブSRF変異体発現によりNECC1発現時と同様、分化刺激存在下でのRCHO-1細胞分化を阻害した。
3.細胞老化誘導に関与するRas/ERα:ERαはRasの下流で細胞形質転換に機能する。ERαの機能的不活化はP14^<ARF>欠損細胞にMDM2/p53/p21シグナル伝達を介して細胞老化を誘導する。MDM2を不活化する手段としてsiRNAを、またERαを不活化する手段としてMEK阻害剤と抗エストロゲン剤の同時投与を採用し、子宮体癌及び卵巣癌細胞における老化誘導を検討した。その結果、両法共に癌細胞老化誘導能を示すことが判明した。MEK阻害剤は有毒であるが、低濃度で老化誘導が示されたため、今後の分子標的治療開発へ有用であることが判明した。
4.細胞老化誘導に関与するp21シグナル:p21欠失変異体を用いた解析により、CDK結合領域に細胞老化誘導能を認めた。また、p21発現の顕著な亢進は癌細胞にアポトーシスを、中等度発現では老化が誘導された。本細胞老化の誘導にRb蛋白は必須ではなく、ROS阻害剤によりp21により誘導される細胞老化は消失した。このためp21下流でROS蓄積に伴うDNA損傷と細胞老化の誘導との関連が示唆された。
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