| 研究課題/領域番号 |
14206026
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| 研究機関 | 東京水産大学 |
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研究代表者 |
塩見 一雄 東京水産大学, 水産学部, 教授 (90111690)
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| 研究分担者 |
石崎 松一郎 東京水産大学, 水産学部, 助手 (40251681)
潮 秀樹 東京水産大学, 水産学部, 助教授 (50251682)
八村 敏志 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (40238019)
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| キーワード | 魚類 / アレルゲン / パルブアルブミン / コラーゲン / cDNAクローニング / モノクローナル抗体 / lgE結合エピトープ / T細胞エピトープ |
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| 研究概要 |
1.9種魚類(ウナギ、マイワシ、マアジ、チダイ、マダイ、マサバ、カツオ、メバチ、ヒラメ)の普通筋からパルブアルブミン(PA)を精製し、患者血清を用いたELISAおよび阻害ELISAの結果から、いずれの魚種においてもPAは主要アレルゲンであること、各魚種のPAはお互いに抗原交差性を有することを確認した。また、ウシガエル筋肉から精製したPAも魚類PAと交差性があることを認めた。
2.ニジマスおよびマサバの普通筋ならびに皮からコラーゲンを精製し、α鎖を分離した。各α鎖はいずれもアレルゲン性および抗原交差性を示した。
3.5種魚類(マイワシ、マアジ、チダイ、マサバ、カツオ)のPAをコードするcDNAクローンの塩基配列を決定し、その演繹アミノ酸配列からいずれのPAもβタイプに属することを明らかにした。さらに、マサバPAをGST融合タンパク質として大腸菌で発現させ、精製したリコンビナントPAは天然PAと同等のアレルゲン性を有することを確認した。
4.マサバPAの全長をカバーする15残基のオーバーラップペプチドを合成し、阻害ELISAにより主要なIgE結合エピトープを含む3箇所のペプチド領域を明らかにした。
5.PAに対するモノクローナル抗体を作製し、本抗体を固相化した表面プラズモン共鳴現象により、数fmoleの魚類PAを約5分で迅速に定量できることを示した。
6.PAのマウスへの免疫方法を検討し、CFAと精製PAを皮下投与した後、精製PAを経口投与する方法が最善であることをみいだした。免疫マウスから得た脾臓細胞およびリンパ節細胞をPAで刺激しながら継代培養中で、PAのT細胞エピトープ解析に向けてPA応答性T細胞を樹立できる予定である。
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