西ナイル熱ウイルスなどのフラビウイルス感染症の診断法、疫学および予防法

2003 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14206036
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 高島 郁夫 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 教授 (30002083)
• 研究分担者: 森田 公一 長崎大学, 熱帯医学研究所, 教授 (40182240) ; 水谷 哲也 国立感染症研究所, 主任研究員 (70281681) ; 苅和 宏明 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助教授 (70224714) ; 竹上 勉 金沢医科大学, 総合医学研究所, 教授 (10113490) ; 只野 昌之 琉球大学, 医学部, 助教授 (80179712)
• キーワード: 西ナイル熱 / フラビウイルス感染症 / 診断 / 疫学

研究概要

フラビウイルスの血清診断用抗原を作製するために、ダニ媒介脳炎ウイルスOshima株のprMとE領域をクローニングしプラスミドCAGGSAに挿入し、人腎細胞由来293T細胞にトランスフェクトさせ、Eタンパク抗原を発現させた。このEタンパク抗原を用いてダニ媒介脳炎のIgM-ELISAおよびIgG-ELISAを確立した。ロシアハバロフスクのダニ媒介脳炎の患者血清83検体を対象としてIgG-ELISAを行い中和試験の結果と比較したところ、敏感度は98.8%、特異度は100%であった。IgM-ELISAでは17名の患者血清のうち16名(94.1%)が陽性と診断された。
次にウエストナイルウイルスと他のフラビウイルスのPCR法による簡便で迅速な鑑別診断法につき検討を加えた。用いたプライマーはウエストナイルウイルスと日本脳炎ウイルスの両者を、増幅できるように、NS1とNS2領域にある共通配列を選択した。このプライマーを用いることによりすべてのウエストナイルウイルス株と日本脳炎ウイルス株を増幅することができた。この増幅産物のTagIの切断パターンによりウエストナイルウイルス株と日本脳炎ウイルス株を区別することができた。さらにウエストナイルウイルスのNY株、Eg101株およびFCG株の区分が可能となった。
ダニ媒介性脳炎ウイルスをBHK細胞に継代したところ、弱毒化変異株が得られた。この変異のマウスにおける神経侵襲性は親株より低かった。この変異はE-タンパクの一つのアミノ酸の違いから起こっており、マウスでのウイルス血症力価の低さと生体内の陰性の電荷を持った分子への高い親和性と関連していた。

研究成果

• [文献書誌] Mizutani, T., et al.: "Involvement of the JNK-like protein of the Aedes albopictus mosquito cell line, C6/36, in phagocytosis, encdocytosis and infection of West Nile virus."Insect Molecular Biology. 12(5). 491-499 (2003)
• [文献書誌] Yoshii, K., et al.: "Enzyme-linked immunosorbent assay using recombinantantigens expressed in mammalian cells for serodiagnosis of tick-borne encephalitis."J.Virol.Method. 108(2). 171-179 (2003)
• [文献書誌] Mizutani, T., et al.: "Characterization of JNK-like protein derived from mosquito cell line, C6/36."Insect Mol.Biol. 12(1). 61-66 (2003)
• [文献書誌] Shirato, K., et al.: "Discrimination of West Nile Virus and Japanese Encephalitis Virus Strains Usibg RT-PCR RFLP Analysis."Microbiol Immunol. 47(6). 439-445 (2003)
• [文献書誌] Goto, A., et al.: "A BHK-21 cell culture-adapted tick-borne encephalitis virus mutant is attenuated for neuroinvasiveness."Vaccine. 21. 4043-4051 (2003)