Ewing肉腫の発がん機構の解明と分子標的治療の開発

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14207057
• 研究種目: 基盤研究(A)
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 岩本 幸英 九州大学, 大学院・医学研究院, 教授 (00213322)
• 研究分担者: 田仲 和宏 九州大学, 医学部附属病院, 助手 (10274458) ; 小田 義直 九州大学, 大学院・医学研究院, 教授 (70291515)
• キーワード: Ewing肉腫 / EWS-Fli1 / 融合遺伝子 / 細胞周期 / アポトーシス / 分子標的

研究概要

Ewing肉腫(ES)は、骨軟部悪性腫瘍の中で最も生命予後不良な腫瘍である。ESの90%以上の症例で染色体転座t(11:22)(q24; q12)がみられ、その結果、異常な融合遺伝子EWS-Fli1が生じる。この融合遺伝子産物は強力な転写因子として働き、正常線維芽細胞をtransformする活性を有することが知られており、異常な転写因子EWS-Fli1はESの発がん原因そのものと考えられている。これまでに我々は、ES細胞株を用いEWS-Fli1融合遺伝子発現と増殖能との間に正の相関があり、EWS-Fli1融合遺伝子はESの癌化のみならず、その生物学的性質をも規定している可能性があることを示してきた。さらに我々は、EWS-Fli1は癌抑制遺伝子Rbに関わる細胞周期制御因子を標的とし、Rb経路を阻害することがES発がんに深く関与していることを明らかにした。しかし、ESではゲノムの守護神とも称されるp53が正常であることが多く、Rb経路の異常だけでESの発がんを説明することはできない。本研究の目的は、転写因子EWS-FIi1によってp53の機能がどうのように抑制されているかを解明し、ES発がん機構の全容を明らかにすること、さらに、そこに関わるEWS-Fli1の標的遺伝子を明らかにし、そのシグナル伝達経路を阻害することで、ES細胞の増殖等の悪性形質を有効に抑制できるか検討を加えること、である。
EWS-Fli1によるp53機能抑制機構の解明のため、本年度は以下の実験を行った。
1)ES細胞株におけるp53機能の解析
各種ES細胞株を用いて、p53の変異状態を調べ、p53正常とp53異常の細胞に分けた。p53正常のES細胞では、p53変異ES細胞に比して、細胞増殖が遅く、接着能も弱かった。これらのES細胞にp53発現ベクターを導入したところ、p53の過剰発現により細胞はアポトーシスに陥り、ES細胞増殖が制御可能であった。これらの結果は、p53正常ES細胞においてもp53の機能抑制が生じており、その抑制がp53過剰発現により克服されたことを示唆する。ESにおけるp53機能回復の重要性が示されたものと考えている。
2)EWS-Fli1とp53の相互作用の解析
EWS-Fli1とp53の結合の有無を免疫沈降実験で調べた。p53正常ES細胞およびp53発現ベクターを導入したp53欠損ES細胞から核抽出液を採取し、Fli1抗体あるいはp53抗体で沈降し、p53抗体あるいはFli1抗体でブロットした。また、in vitroで合成したEWS-Fli1とp53を用いて同様の実験を行った。その結果、EWS-Fli1とp53は確かに結合していることが明らかとなり、その相互作用によりp53の機能が抑制されているものと推察された。

研究成果

• [文献書誌] Saito T, et al.: "Matrix metalloproteinase-2 expression correlates with morphological and immunohistochemical epithelial characters in synovial sarcoma"Histopathology. 40. 279-285 (2002)
• [文献書誌] Saito T, et al.: "APC mutations in synovial sarcoma"J. Pathol.. 196. 445-449 (2002)
• [文献書誌] Saito T, et al.: "Possible association between higher β-catenin mRNA expression and mutated β-catenin in sporadic desmoid tumors : Real-time semiquantitative assay by TaqMan PCR"Laboratory Invest.. 82. 97-103 (2002)
• [文献書誌] Sakamoto A, et al.: "Calponin and h-caldesmon expression in atypical fibroxanthoma and superficial leiomyosarcoma"Virchows. Arch.. 440. 404-409 (2002)
• [文献書誌] Shiratsuchi H, et al.: "Mutation analysis of human cytokeratin 8 (KRT 8) in malignant rhabdoid tumor : A possible contibution to intracytoplasmic inclusion body formation"Mod. Pathol.. 15. 146-153 (2002)
• [文献書誌] Itokawa T, et al.: "Antiangiogenic effect by SU5416 is partly attributable to inhibition of Flt-1 receptor signaling"Molecular Cancer Therapeutics. 1. 295-302 (2002)
• [文献書誌] Matsumoto Y, et al.: "Possible involvenemt of the vascular endothelial growth factor-Flt-1-Focal adhesion kinase pathway in chemotaxis and the cell proliferation of osteoclast precursor cells in arthritic joints"J. Immunology. 168. 5824-5831 (2002)
• [文献書誌] Sakamoto A, et al.: "Vascular compression caused by solitary osteochondroma : useful diagnostic methods of magnetic resonance angiography and Doppler ultrasonography"J. Orthop. Sci.. 7. 439-443 (2002)
• [文献書誌] Tanaka K, et al.: "High-dose chemotherapy and autologous peripheral blood stem cell transfusion after conventional chemotherapy for patients with high-risk Ewing's tumors"J. Orthop. Sci.. 7. 477-482 (2002)
• [文献書誌] Sakamoto A, et al.: "β-catenin accumulation and gene mutation in Exon 3 in dedifferentiated liposarcoma and malignant fibrous histiocytoma"Arch Pathol. Lab. Med.. 126. 1071-1078 (2002)
• [文献書誌] Kawaguchi K, et al.: "Molecular analysis of p53, MDM2, and H-ras genes in osteosarcoma and malignant fibrous histiocytoma of bone in patients older than 40 years"Mod. Pathol.. 15. 878-888 (2002)
• [文献書誌] Oda Y, et al.: "Reassessment and clinicopathological progonostic factors of malignant fibrous histiocytoma of soft parts"Pathol. Int.. 52. 595-606 (2002)
• [文献書誌] Sakamoto A, et al.: "Solitary lymphangioma of the femur. A case report"J. Orthop. Sci.. 7. 504-504 (2002)
• [文献書誌] Miyajima K, et al.: "Clinicopathologic prognostic factors in soft tissue leiomyosarcoma. A multivariate analysis"Histopathology. 40. 353-359 (2002)
• [文献書誌] Nishio J, et al.: "Establishment of a new human synovial sarcoma cell line, FU-SY-1, that express c-MET receptor and its ligand hepatocyte growth factor"Int. J. Oncol.. 21. 17-23 (2002)
• [文献書誌] Oda Y, et al.: "Molecular genetic abnormalities and their usefulness for diagnosis and prediction of prognosis in soft-tissue sarcomas"Recent Res. Devel. Cancer. 4. 305-315 (2002)
• [文献書誌] Saito T, et al.: "Low-grade fibrosarcoma of the proximal humerus. A case report with a review of literatures"Pathol. Int.. 53. 49-54 (2002)
• [文献書誌] Oda Y, et al.: "Letter to the Editor ; Leiomyosarcoma versus myofibrosarcoma. Author's reply"Am. J. Surg. Pathol.. 26. 394-396 (2002)
• [文献書誌] 播广谷勝三, 岩本幸英(分担執筆): "今日の処方 第3版"南江堂. 935 (2002)
• [文献書誌] 松田秀一, 岩本幸英(分担執筆): "新 OS NOW 新世代の整形外科手術、No. 13"Medical View社. 192 (2002)