ニワトリにおけるウイルス低抗性Mx遺伝子を利用した抗病性育種

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14360161
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 渡辺 智正 北海道大学, 大学院・農学研究科, 教授 (10100174)
• 研究分担者: 鈴木 啓太 北海道大学, 北方生物圏フィールド科学センター, 助手 (60261335) ; 浅野 淳 北海道大学, 大学院・獣医学研究科, 助手 (90312404) ; 森 匡 北海道大学, 大学院・農学研究科, 助手 (30230072) ; 大原 睦生 北海道立畜産試験場, 企画調整室, 室長
• キーワード: ニワトリ / Mx遺伝子 / 人工突然変異法 / アミノ酸置換 / 感染実験 / DNA / PCR-RFLP法 / ウイルス

研究概要

これまで20品種以上のニワトリを用いて、Mx遺伝子の多様性と抗病性研究を行ってきた。In vitro感染実験の結果、631番地のアミノ酸がAsnの場合抵抗性、Serの場合感受性であることを明らかにした。今回この置換が決定的な差異を生じているのか人工突然変異法(artificial mutation)で確かめるとともに、ミスマッチPCR-RFLP法により変異を簡易的に診断する方法を確立した。
Mxの631番地のアミノ酸をAsnとSer間で人為的に置換させた。In vitro感染実験はMxcDNAを発現ベクターに組み込み、マウス3T3細胞に導入して、変異型水痘性口内炎ウイルスを用いて行った。両方向で人為的にアミノ置換させるよう設計されたMxcDNAにおいても、631番地がAsnの場合抵抗性、Serの場合感受性であった。このことは、遺伝子型と表現型が一致することを意味する。
次に、ミスマッチPCR-RFLP法によりMx遺伝子が抵抗性あるいは感受性形質かを、おもに(独)家畜改良センター岡崎牧場の集団を用いて少量の血液からゲノムDNAを抽出し、解析した。白レグ、白ロック、ロード、三河、名古屋などの集団(合計約500羽)を用いて簡易診断したところ、全体でほぼ50%ずつの分布を示した。現在は、631番地のアミノ酸がAsnの場合抵抗性、Serの場合感受性であることが、個体レベルでも適用されるのか、in vivo感染実験を計画している。

研究成果

• [文献書誌] EI-Nahas A., Watanabe T.et al.: "The differential effect of Kitw. mutation with other Kit allelic combinations on male sterility among inter-or intraspecific hybrid mice"Biochemical Genetics. 40. 13-25 (2002)
• [文献書誌] Okano S., Watanabe T.et al.: "Genetic analysis of Jumbled spine and ribs (Jsr) mutation affecting the vertebral development in mice"Biochemical Genetics. 40. 311-322 (2002)
• [文献書誌] Ko JH., Watanabe T.et al.: "Polymorphisms and the differential antiviral activity of the chicken Mx gene"Genome Research. 12. 595-601 (2002)
• [文献書誌] Ables GP., Watanabe T.et al.: "Sequence analysis of the NRAMP1 genes from different bovine and buffalo breeds"Journal of Veterinary Medical Science. 64. 1081-1083 (2002)
• [文献書誌] Asano A., Watanabe T.et al.: "Polymorphisms and the dantiviral property of porcine Mx1 protein"Journal of Veterinary Medical Science. 64. 1085-1089 (2002)