末梢抵抗血管における新型電位依存性Ca^<2+>チャネルの遺伝子クローニング

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14370033
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 伊東 祐之 九州大学, 大学院・医学研究院, 教授 (80037506)
• 研究分担者: 石橋 仁 九州大学, 大学院・医学研究院, 講師 (50311874) ; 井上 隆司 九州大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (30232573)
• キーワード: 電位依存性Caチャネル / ジヒドロピリジン非感受性 / 阻害薬 / 血圧 / 抹消循環 / 腸間膜動脈

研究概要

末梢抵抗血管系には、従来報告されている電位依存性Ca^<2+>チャネルとは全く異なる生物物理学的・薬理学的性質を有する、ニフェジピン非感受性、高電位活性化型Caチャネル(NICC)が優勢に発現していることが、最近の我々の一連の研究から明らかになってきた。このCaチャネルが、既知の電位依存性Caチャネル遺伝子(α1A-H)いずれかのsplice variantである可能性は完全には否定できないが、幾つかの状況証拠から、これらとは全く異なる遺伝子によってコードされていることが強く示唆される。そこで、本研究では、その最初の段階として、まず、NICCが優勢に発現しているラット腸間膜動脈最終分岐部から単離した細胞から直接mRNAを抽出し、既知の電位依存性Caチャネルが発現しているかどうか、それぞれの特異的プライマーを用いて、単一細胞逆転写遺伝子増幅法(single cell RT-PCR)によって検討した。これまで行なった数回の実験では、腸間膜動脈末梢部平滑筋細胞からは、3種のT型チャネルを含むいずれの既知のCaチャネル遺伝子も検出できなかった。次に、20匹のラットから採取した、腸間膜動脈(近位側も含む)樹状組織標本約100本からmRNAを抽出し、cDNAライブラリーの作成を試みた。しかし、これらの中に存在すると思われるL型Caチャネルの遺伝子(機能的実験の結果から示唆されている)が確認できない段階にあり、現在、抽出法からライブラリー作成に至るまでのプロトコールを再検討して、確実に全長mRNAが取れてくる条件を検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Hiromitsu Morita, Thapaliya Sharada, Tadashi Takewaki, Yushi Ito, Ryuji Inoue: "Multiple regulation by external ATP of nifedipine-insensitive, high voltage-activated Ca^<2+> current guinea-pig mesenteric terminal arteriole"Journal of Physiology. 539・3. 805-816 (2002)
• [文献書誌] Hiromitsu Morita, Juan Shi, Yushi Ito, Ryuji Inoue: "T-channel-like pharmacological properties of high voltage-activated, nifedipine-insensitive Ca^<2+> currents in the rat terminal mesenteric artery"British Journal of Pharmacology. 137. 467-476 (2002)
• [文献書誌] Hiromitsu Morita, Kihachiro Abe, Yushi Ito, Ryuji Inoue: "Possible involvement of M_5 muscarinic receptor in the enhancing actions of the novel gastroprokinetic agent Z-338 on nifedipine-sensitive voltage-dependent Ca^<2+> currents in guinea-pig stomach"Japanese Journal of Pharmacology. 89. 356-365 (2002)
• [文献書誌] Yasuhiro Itonaga, Tadasu Nakajima, Hiromitsu Morita, Toyohisa Hanano, Yuji Miyauchi, Yushi Ito, Ryuji Inoue: "Contribution of nifedipine-insensitive voltage-dependent Ca^<2+> channel to diameter regulation in rabbit mesenteric artery"Life Sciences. 72. 487-500 (2002)
• [文献書誌] Ryuji Inoue, Yasuo Mori: "New target molecules in the drug control of blood pressure and circulation"Current Drug Targets. 3. 59-72 (2003)