多機能SERPIN,プロテインCインヒビター関連疾患の分子病態学的研究

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14370055
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 鈴木 宏治 三重大学, 医学部, 教授 (70077808)
• 研究分担者: GABAZZA Esteban 三重大学, 医学部, 助手 (00293770) ; 鎌田 春彦 三重大学, 医学部, 助手 (00324509) ; 林 辰弥 三重大学, 医学部, 講師 (00242959) ; 和田 英夫 三重大学, 医学部, 助教授 (40158704)
• キーワード: プロテインCインヒビター / SERPIN / 腎癌細胞 / 種特異的臓器発現 / HGFアクチベーター / 遺伝子メチル化 / 肝障害 / 肝再生

研究概要

プロテインCインヒビター(PCI)は血漿SERPINの一つであり、我々はこれまでにPCIは血漿中では活性化プロテインC(APC)の制御因子として,腎癌では腎癌細胞の増殖と転移浸潤の制御因子として、また、肝切除患者では肝増殖因子アクチベーター(HGFA)の阻害因子として機能することを明らかにしてきた。本研究ではこの2年間に,PCIの種依存性の臓器特異的な発現に関する研究、及び臓器特異的病態の発生に関わるPCIの作用機構を解明することを目的とし、今年度は以下の成果を得た。
1.PCIの種依存性の臓器特異的発現機構の解析:ヒトPCI遺伝子上の種特異的発現を規定する領域を同定するため、種々の長さのヒトPCI遺伝子上流域断片を含むルシフェラーゼ(Luc)発現ベクターを構築した。今後,ヒト及びマウス由来の肝細胞と精巣細胞で発現態度が異なる断片を検索する。また、PCIの臓器特異的発現機構を解明するため、PCIの発現動態が異なるヒト組織細胞や株化細胞Lucレポーター遺伝子を用いて検討する。
2.腎癌の発生と腎癌細胞の浸潤転移におけるPCIの作用の解析:腎癌部組織におけるPCIの発現低下機構を解明するため、腎癌部組織から得たPCI遺伝子の転写調節領域のメチル化の有無をメチル化特異的PCR法で解析したが、プロモーター領域のメチル化は認めなかった。今後、3領域の遺伝子変異の有無を解析する。また、腎細胞の癌化に及ぼすPCIの影響を解明するため,PCIを発現しない腎癌由来株化細胞(caki-1)のDNAをNIH/3T3細胞に導入し,この癌細胞のフォーカス形成能を検討したが、PCIは癌化には影響せず、癌細胞のマトリゲル浸潤を阻害することを明らかにした。
3.肝障害におけるPCIの分子病態学的解析:精製PCIと組換えHGFAを用いて、PCIによるHGFA阻害機構を解析した。また、肝細胞におけるHGFAとPCIの産生機構を解明する第一歩として、障害肝細胞でのHGFAとPCIの産生に及ぼす炎症性サイトカインの影響を解析した。
次年度はこれらの研究をさらに発展させたい。

研究成果

• [文献書誌] Hori Y, Suzuki, K., et al.: "Insulin resistance is associated with increased circulating level of thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor in type 2 diabetic patients"J. Clin. Endoc. Metabol.. 87. 660-665 (2002)
• [文献書誌] Hataji, O., Suzuki, K., et al.: "Activation of protein C pathway in the airways"Lung. 180. 47-59 (2002)
• [文献書誌] Gabazza, E.C., Suzuki, K., et al.: "Adenosine inhibits thrombin-induced expression of tissue factor on endothelial cells by a nitric oxide-mediated mechanism"Clin. Science. 102. 167-175 (2002)
• [文献書誌] Iida, T., Mine, S., Suzuki, K., et al.: "Hypoxia-inducible factor-1a induces cell cycle arrest of endothelial cells"Genes to Cells. 7. 143-149 (2002)
• [文献書誌] Kume, M., Suzuki, K., et al.: "Bacterial lipoplysaccharide decreases thrombomodulin expression on sinusoidal endothelial cells of rats, which may induce liver dysfunction via microthrombus formation in the sinusoids"J. Hepatol.. 38. 9-17 (2003)
• [文献書誌] Shimizu, S., Suzuki, K., et al.: "The Natural anticoagulant activated protein C inhibits the expression of platelet-derived growth factor in the lung"Am. J. Respir. Crit. Care Med.. (In press). (2003)
• [文献書誌] 鈴木 宏治(大内和雄 編集): "廣川タンパク質化学 第7巻 制御タンパク質-インヒビター"廣川書店 東京. 196 (2002)