研究課題
基盤研究(B)
HCV replicon増殖制御するNS5A蛋白は、以前より種々の宿主細胞側蛋白と相互作用することが明らかとされてきた。しかし、これらの相互作用がHCV増殖に実際にどのような影響を与えているかはreplicon systemの開発までは解析不可能であった。本研究では、HCV repliconHCV増殖におよぼすHCV遺伝子変異の効果をまず検討した。その結果、repliconの増殖が種々のNS5A ISDRの変異により変化すること、このISDR変異はNS5A蛋白の過剰リン酸化を制御していることを明らかとした。さらに、NS3 helicase domainの遺伝子構造がHCV replicon増殖能に影響する知見も得た。次に、HCV replicon増殖細胞、NS5A発現細胞での遺伝子発現変化をmicroarrayおよびsubtractionで包括的に検討し、HCV増殖が宿主細胞遺伝子発現へ及ぼす影響の全体像を検討した。その結果、HCV replicon増殖細胞では、interferon誘導遺伝子の活性化が全般に低下していることが明らかとなった。IRF-1の低下が認められること、IRF-3の活性化障害が生じていること、さらにNF-kB誘導遺伝子群の発現低下が認められることを見出した。さらにHCV replicon増殖細胞およびinterferonによりHCV repliconを除去したcure細胞ではISGおよびIRF-1の活性低下が回復しないことから、何らかのメカニズムによるdsRNAに対する自然免疫系の破綻がHCV replicon増殖に必須であると考えれた。このような自然免疫系の低下した細胞では、NS5Aに認められるadaptive mutationの必要性が低下することから、NS5Aの機能は自然免疫系によるHCV増殖抑制と密接な関連があることが示された。一方、HCV replicon系を応用した新たなHCV増殖制御法の開発として、5'UTRをtargetとしたsiRNAを作成、HCV増殖抑制系の開発に成功した。この成果はadenovirus vectorを用いたshRNAによるin vivoでのHCV増殖抑制に展開している。また、HCV増殖が免疫抑制剤であるcyclosporin Aによる抑制されることを見出した。Cyclosporin Aは分子シャペロンであるcyclophilinの阻害剤であり、小胞体ストレスの制御がHCV増殖と密接な関連にあることを明らかとした。
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