解毒・排泄機構の臓器相関と関連遺伝子の導入による機能改善に関する研究

2004 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 14370178
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 足立 幸彦 三重大学, 医学部, 教授 (50111026)
• 研究分担者: 小林 由直 三重大学, 医学部附属病院, 助手 (70378298)
• 研究期間 (年度): 2002 – 2004
• キーワード: トランスポーター / 遺伝子導入 / 遺伝子多型 / Uridine-diphosphate glucuronosyltransferase / multidrug resistance-associated protein / organic anion transporting / polypeptide

研究概要

ビリルビンを抱合するbilirubin UDP-glucronosyltransferase (UGT1A1)の日本人における遺伝子多型は蛋白コード領域でもみられ、欧米の報告とは異なっていた。UGT1A1のタンパクコード領域における多型パターンと血清ビリルビン値は相関が認められた。新たなUGT1A1遺伝子多型(P364L)を発見し、この時のUGT1A1の酵素活性は正常よりも64.4%低下する事を明らかにした。
有機アニオントランスポーターの一つであるmultidrug resistance-associated protein 2 (mrp2)の発現が欠損したEisai hyperbilirubinuria rat (EHBR)およびugt1a1活性が欠損したGunn ratの肝細胞においては、有機アニオンを類洞血液中に排泄するmrp3の発現が増加し、有機アニオンを肝細胞内に取り込むorganic anion transporting polypeptide (oatp)の発現は減少していた。さらにEHBRおよびGunn ratの腎臓においてもmrp3の発現の増加が見られることを明らかにした。
Full length human MRP2遺伝子をクローニングし、哺乳動物細胞発現ベクター(pDEST-MRP2)を構築した。pDEST-MRP2を培養細胞(IEC-6)へ導入し、MRP2の蛋白が発現することを確認した。さらにEHBRの肝臓にpDEST-MRP2のin vivo遺伝子導入を行い、血中抱合ビリルビン値の低下を認め、oatp1,oatp2およびmrp3発現の正常化を確認した。
また、マウス胎生幹細胞にhepatocyte nuclear facto-3β (HNF3β)を導入することによりmrp1,mrp2,mrp3およびugt1a1のmRNAおよび蛋白質が発現する事を明らかにし、HNF3β導入による胎生幹細胞から肝細胞への分化することを証明した。

研究成果

• [雑誌論文] Hepatic uptake of bilirubin revisited. (2005)
  • 著者名/発表者名: Yukihiko Adachi, Yoshinao Kobayashi
  • 雑誌名: Hepatol Res (in press)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Increased hepatic and renal expression of multidrug resistance-associated protein 3 in Eisai hyperbilirubinuria rat (2004)
  • 著者名/発表者名: Kuroda M., Kobayashi Y., Tanaka Y, Itani T, Mifuji R, Araki J, Kaito M, Adachi Y
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology and Hepatology 19 ページ: 146-153
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Modulation of organic anion transporting polypeptide 1 and multidrug resistance protein 3 expression in the liver and kidney of Gunn rats. (2004)
  • 著者名/発表者名: Higuchi K, Kobayashi Y, Kuroda M, Tanaka Y, Itani T, Araki J, Mifuji K, Kaito M, Adachi Y
  • 雑誌名: Hepatology Research 29 ページ: 60-66
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Genetic polymorphisms of bilirubin uridine diphoshate-glucuronosyltransferase gene in Japanese patients with Crigler-Najjar syndrome or Gilbert's syndrome as well as in healthy Japanese subjects (2004)
  • 著者名/発表者名: Takeuchi K, Kobayashi Y, Tamaki S, Ishihara, T, Maruo Y, Araki J, Mifuji R, Itani T, Kuroda M, Sato H, Kaito M, Adachi Y
  • 雑誌名: Journal of Gastroenterology and Hepatology 19 ページ: 1023-1028
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Increased hepatic and renal expressions of multidrug resistance-associated protein 3 in Eisai hyperbilirubinuria rats. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kuroda M et al.
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol 19 ページ: 146-153
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Modulation of organic anion transporting polypeptide 1 and multidrug resistance protein 3 expression in the liver and kidney of Gunn rats. (2004)
  • 著者名/発表者名: Higuchi K et al., Tanaka, Toshio Itani, Jun Araki, Rumi Mifuji, Masahiko Kaito
  • 雑誌名: Hepatol Res 29 ページ: 60-66
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Genetic polymorphism of bilirubin UDP-glucronosyltransferase gene (UGT1A1) in Japanese patients with Crigler-Najjar syndrome or Gilbert's syndrome as well as in healthy Japanese subjects. (2004)
  • 著者名/発表者名: Takeuchi K et al.
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol 19 ページ: 1023-1028
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] A case of Dubin-Johnson-like black liver with normal bilirubinemia. (2004)
  • 著者名/発表者名: Yoshinao Kobayashi et al.
  • 雑誌名: J Gastroenterol 39 ページ: 892-895
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Expression of hepatobiliary organic anion transporters and bilirubin-conjugating enzymes in differentiating embryonic stem cells. (2003)
  • 著者名/発表者名: Tanaka Y., Yoshikawa M., Kobayashi Y, Kuroda M, Kaito M, Shiroi A, Yamao J, Fukui H, Ishizuka S, Adachi Y
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communication 309 ページ: 324-330
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] 体質性黄疸 (2003)
  • 著者名/発表者名: 小林由直, 足立幸彦
  • 雑誌名: 肝臓 44 ページ: 483-491
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [雑誌論文] Expressions of hepatobiliary organic anion transporters and bilirubin-conjugating enzyme in differentiating embryonic stem cells. (2003)
  • 著者名/発表者名: Tanaka Y et al.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 309 ページ: 324-330
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [図書] 肝疾患 Review 2004 (2004)
  • 著者名/発表者名: 小林由直, 黒田 誠, 足立幸彦
  • 総ページ数: 237
  • 出版者: 日本メディカルセンター
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より