| 研究課題/領域番号 |
14370245
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
駒田 美弘 三重大学, 医学部, 教授 (80186791)
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| 研究分担者 |
東 英一 三重大学, 医学部附属病院, 助教授 (50211008)
堀 浩樹 三重大学, 医学部, 助教授 (40252366)
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| 研究期間 (年度) |
2002 – 2004
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| キーワード | アポトーシス / Fas受容体 / TRAIL受容体 / アポトーシス抑制分子 / カスパーゼ / 白血病 / 神経芽腫 |
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| 研究概要 |
TRAIL(Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)によって誘導されるアポトーシス細胞死に対する白血病細胞の感受性と細胞内シグナル伝達機構について検討した。TRAILによる細胞死誘導には、DR5の発現が必要であり、細胞死感受性細胞と耐性細胞いずれの細胞においても、TRAIL刺激によりDR5は細胞内に取り込まれ、FADD分子の会合が見られた。しかし、活性化カスパーゼ-8のFADD分子への会合とその活性化の亢進は、感受性細胞においてのみ認められ、カスパーゼ-8を特異的に抑制するZ-IETDの添加により、カスパーゼ-8の活性化、およびTRAILによるアポトーシス細胞死は完全に抑制された。カスパーゼ-8の活性化抑制分子であるFLICE-inhibitory protein/FLIP分子は、細胞死感受性細胞と耐性細胞のいずれにも発現しており、またTRAIL刺激により、速やかにその発現が低下した。興味あることに、いくつかの白血病細胞株において、蛋白合成阻害剤のcycloheximide処理により、カスパーゼ-8の活性化の増強、あるいは誘導とともに、TRAIL感受性の亢進、耐性の消失が認められた。また、cycloheximideの添加によりX-linked inhibitor of apoptosis protein/XIAP発現の著明な低下が観察され、活性化カスパーゼ-8のFADD分子への会合とその活性化の亢進が見られた。以上の結果より、白血病細胞におけるTRAILに対する耐性は、XIAPを主とするアポトーシス細胞死抑制分子により、カスパーゼ-8の活性化レベルにおいてシグナル伝達経路が阻害されることによることが示唆された。
Fasリガンドによるアポトーシス細胞死誘導に対する神経芽腫細胞の感受性について検討した。Fas受容体の発現強度とFasリガンドによる細胞死誘導との間には相関関係は認められなかった。細胞内シグナル伝達分子の検索からは、正常カスパーゼ-8陽性細胞は高感受性であるのに対して、陰性例は耐性を示した。また、分子量の小さなカスパーゼ-8分子(short-form caspase-8)が発現する細胞は低感受性を示した。Fasリガンド刺激によるカスパーゼ-8の活性は、正常カスパーゼ-8分子を持つ細胞にて高い上昇を、short-form caspase-8を発現する細胞では弱い上昇を認めた。このshort-form caspase-8をコードする遺伝子にはエクソン3の欠失が認められ、その結果、2つのdeath effector domain/DEDのうちのひとつが欠損しており、カスパーゼ-8活性の低下に関与していると考えられた。以上の結果より、神経芽細胞におけるFasリガンドに対する感受性は、カスパーゼ-8の発現プロフィールにより決定されていることが示唆された。
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