U937細胞を用いた温熱応答メカニズムの解析

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14370271
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 鈴木 紀夫 東京大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (10010050)
• 研究分担者: 森田 明典 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (90334234) ; 松本 義久 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (20302672) ; 榎本 敦 東京大学, 大学院・医学系研究科, 助手 (20323602)
• キーワード: 温熱高感受性 / SAPK / JNK / Akt / Wortmannin / リン酸化特異抗体 / 細胞死 / セラミド / 温熱療法

研究概要

本申請では、p53がnullで機能していないが温熱高感受性のU937細胞を用い、温熱高感受性のメカニズム、温熱応答、特に細胞死に至るシグナル伝達と応答遺伝子、タンパク質を明らかにする。そして温熱治療に有用な感受性修飾法の開発を長期目標とする。細胞の生死は細胞の生存、増殖に関わるMAPK(Mitogen activated protein kinase),Akt経路と細胞死に関わるSAPK(Stress activated protein kinase)のバランスによって決定されるという仮説がある。
温熱応答に至るシグナルの発生、伝達に関与すると考えられている脂質分子セラミド生成の阻害剤のSAPK, MAPK, AKTシグナル伝達経路と温熱感受性への影響効果。更に、温熱細胞死におけるDNA-PKの役割とWortmanninの温熱増感への関与メカニズム解明。シグナル伝達に続き誘導される遺伝子群や応答タンパクのうち、温熱応答、特に細胞死、感受性に関与する因子を確定する。
温熱抵抗性株、,シグナル伝達因子変異株.(jnk 1 dominant the negative mutant),各種阻害剤(セラミド阻害剤)を処理した細胞やアポトーシス関連遺伝子bcl-2導入株の温熱処理後のDNA. arrayによる遺伝子発現の解析。2次元電気泳動による誘導タンパク質の解明とアンチセンス導入による確認等をおこなっている。Wortmanninの濃度とシグナル分子の活性化(SAPK/JNK, SAPK/p38, MAPK, AKTのリン酸化特異抗体を用いて)の解析と温熱細胞死の増感効果関係からその増感効果はSAPK/JNK経路の増強によると考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Enomoto, A., et al.: "Decrease c-Myc expression in X-ray-induced apoptotic cell death of human T-cell leukemia cell line MOLT-4"Int. J. Radiat. Biol.. (in press).
• [文献書誌] Hosoi, Y., et al.: "Phosphorothioate oligonucleotides, suramin and heparin inhibit DNA-dependent protein kinase activity"Br. J. Cancer.. 86. 1143-1149 (2002)
• [文献書誌] Yoshida, M., et al.: "Roles of DNA-dependent protein kinase and ATM in cell-cycle dependent radiation sensitivity in human cells"Int. J. Radiat. Biol.. 78. 503-512 (2002)
• [文献書誌] Komuro, Y., et al.: "The expression pattern Ku correlates with tumor radiosensitivity and disease free survival in patients with rectal carcinoma"Cancer. 95. 1195-1205 (2002)