| 研究概要 |
転写制御の観点から血液細胞の分化制御およびlineage switchを分子レベルで検討するため、骨髄球系特異的転写因子であるC/EBPα, PU.1をエストロゲンレセプターのリガンド結合領域と融合させ、さらにこの領域に点突然変異を導入して4-hydroxy tamoxifen (4-HT)にのみ反応する活性誘導型転写因子を作製した。さらに、これをH-2Kプロモーターの下流につないだコンストラクトを作製、これから切り出したDNAフラグメントをマウスの受精卵にマイクロインジェクションし、トランスジェニックマウス(Tg)を作製した。
C/EBPα-ER Tgは計8ライン、PU.1-ER Tgは計5ラインにおいてtransgeneの染色体へのインテグレーションをサザンブロット法により認めた。これらにおけるtransgeneの発現をRT-CRにて確認したところ、C/EBPα-ER Tgでは5ラインにtransgeneの発現を認めたが、ウエスタンブロット法による蛋白の確認では1ラインのみがC/EBPα-ER蛋白を発現していた。C/EBPα-ER蛋白は胸腺・脾臓に高発現しており、骨髄・末梢血でも中等量発現していた。また、発現したC/EBPα-ER蛋白は4-HTに反応してDNA結合能を示すことがゲルシフト法により確認された。
今後はこれらのTgマウスを用い、4-HTにより転写活性を誘導した場合の血球分化の変化をコロニーアッセイ、FACSなどにより詳細に解析していく予定である。
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