Wntシグナル伝達経路の制御による大腸癌肝転移治療法の開発

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14370391
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 岡島 正純 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 講師 (90274068)
• 研究分担者: 菊池 章 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (10204827) ; 浅原 利正 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (70175850)
• キーワード: 大腸癌 / 転移性肝癌 / 遺伝子治療 / Wntシグナル / Axin / TCF

研究概要

1:ラット肝転移モデルの作製
ラット大腸癌由来細胞株RCN-9をラット門脈より注入し、肝転移を形成するモデルを作製した。同モデルの転移巣のパラフィン切片をβ-catenin抗体で免疫染色し、β-cateninの異常蓄積が転移巣で認められることを確認した。
2:β-catenin依存性Axin発現ベクター
転写因子TCF結合配列がそのプロモータ部位にタンデムに組み込まれ、TCF依存性にルシフェラーゼが発現するベクターを利用し、そのプロモーター下流にルシフェラーゼの代わりにラットAxin遺伝子を組み込んだ。理論的にはAxinは蓄積したβ-cateninがTCFを活性化することを介して発現する。現在、GSK-3βの阻害剤であるLiClおよび変異β-cateninの同時トランスフェクションによりAxin発現ベクターを導入した細胞内でβ-catenin依存性にAxinタンパク質が発現するか否かを検証中である。
3:HVJ-Eを用いた遺伝子導入効率
RCN-9やSW480などの培養細胞を用いて行った。GFP発現遺伝子をHVJ-Eに封入し遺伝子導入を行った。現在もっとも高効率が得られる条件を検証中であり、その後ラット肝臓への導入条件を検討する。
4:ヒト正常肝組織・大腸癌肝転移巣・原発性肝癌におけるWntシグナル伝達経路異常の解析
β-cateninの分布を免疫染色によって確認した。正常肝組織においてはβ-cateninは細胞膜にのみ存在していた。大腸癌肝転移巣ではすべての症例で細胞質あるいは核内にβ-cateninは蓄積していた。β-cateninは原発性肝癌では約30%の症例で細胞質あるいは核内での蓄積が認められた。したがって大腸癌肝転移においては腫瘍部においてのみβ-catenin依存性に目的遺伝子の発現が可能と考えた。

研究成果

• [文献書誌] Y.Shimizu: "Frequent alterations in the Wnt signaling parthway in colorectal cancer with microsatellite instability"Genes, Chromosomes & Cancer. 33. 73-81 (2002)
• [文献書誌] S.Ikeda: "Immunohistochemistry of cyclin D1 and β-catenin, and mutational analysis of exon 3 of β-catenin gene in parathyroid adenomas"International journal of oncology. 20. 463-466 (2002)
• [文献書誌] 山本 英樹: "Wntシグナル伝達経路の制御機構と発癌との関連"Molecular Medicine. 39. 1264-1272 (2002)
• [文献書誌] T.Kadoya: "Desumolylation activity of Axam, a novel Axin-binding protein, is involved in downregulation of β-catenin"Molecular and Cellular Biology. 22. 53-60 (2002)
• [文献書誌] H.Tanji: "Augmentation of local antitumor immunity in liver by interleukin-2 gene transfer via portal vein"Cancer Gene Therapy. 9. 655-664 (2002)
• [文献書誌] Y.Hirata: "Yeast glycogen synthase kinase-3 activates Msn2p-dependent transcription of stress responsive genes"Molecular Biology of the Cell. 14. 302-312 (2002)