2003 年度実績報告書

Wntシグナル伝達経路の制御による大腸癌肝転移治療法の開発-Axin遺伝子とTCFおとり遺伝子の導入をHVJ-Eを用いて行う-

研究課題

研究課題/領域番号	14370391
研究機関	広島大学
研究代表者	岡島正純広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (90274068)
研究分担者	菊池章広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (10204827) 浅原利正広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (70175850)
キーワード	大腸癌 / 転移性肝癌 / 遺伝子治療 / Wntシグナル / Axin / TCF
研究概要	(1)TCFおとり遺伝子に関して最近、Wntシグナル経路において転写因子TCFはそのターゲットとなるpromoterに対し抑制的に働いていることが明らかとなりつつある。当初計画していたTCFおとり遺伝子を用いた方法は逆に腫瘍を増大させる方向に作用する可能性が示唆されたため、主にAxin遺伝子導入による腫瘍抑制効果の検討を行うこととした。 (2)ベクターの作成と培養細胞への導入 TCF結合配列がそのプロモーター部位にタンデムに組み込まれ、β-catenin/TCF依存性にルシフェラーゼが発現するベクターをもとに、ルシフェラーゼの代わりにrat Axin遺伝子を組み込んだ。このベクターを培養細胞に導入し、Axinタンパク質の発現を確認した。さらに培養細胞を用い、GSK-3βの阻害薬であるLiClやSB216763の刺激によってβ-cateninの細胞内での蓄積を確認し、さらにβ-catenin依存性のAxinの発現誘導を確認した。しかしながら恒常的にβ-cateninの蓄積が認められる腫瘍細胞株(ヒト大腸癌細胞株など)でのβ-catenin依存性Axin発現やさらにAxin発現によるβ-cateninの減少は明らかではなかった。現在、導入条件を検討中である。 (3)ラット肝転移モデルへの遺伝子導入ラット大腸癌肝転移モデルにおいては、転移巣形成にばらつきがあり正確な評価が困難であった。そこでヌードマウスを用いて皮下に腫瘍細胞を接種して腫瘤を形成したモデルを用い、直接ベクターを投与し抗腫瘍効果の判定を行なった。さらに門脈内腫瘍投与による肝転移モデル作成を行なった。 (4)ヒト正常肝組織、原発性肝癌、大腸癌におけるWntシグナル伝達経路の解析ヒト正常肝組織、原発性肝癌、転移性大腸癌などにおいて免疫染色を行い、β-cateninの蓄積の状態や、局在を確認した。さらにAxin発現も解析を行なった。また、β-cateninの蓄積が認められた症例に対しては、DNAを抽出し、direct sequenceを行ないWntシグナル伝達経路の構成因子であるβ-catenin、Axin、APCの変異の解析を行った。

研究成果

(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Ikeda, S.: "Immunohistochemical and Mutationl Analysis of β-catenin, Ki-ras, and p53 in Two Subtypes of Colorectal Mucinous Carcinoma"Clinical Cancer Research. vol 9. 5660-5665 (2003)
[文献書誌] Ishizaki, Y.: "Immunohistochemical analysis and mutationl analysis of β-catenin, Axin family and APC genes in hepatocellular carcinomas"INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY. (in press). (2004)
[文献書誌] Yamamoto, H.: "Sumoylation is involved in beta-catenin-dependent activation of TCF-4"EMBO J.. 22. 2047-2059 (2003)
[文献書誌] Kikuchi, A.: "Tumor formation by genetic mutations in the components of the Wnt signaling pathway"Cancer Sci.. 94. 225-229 (2003)
[文献書誌] Oshita A.: "Identification and characterization of a novel Dvl-binding protein that suppresses Wnt signaling Pathway"Genes Cells. 8. 1005-1017 (2003)
[文献書誌] Kishida, S.: "Wnt-3a and Dvl induces neurite retraction by activating Rho-associated kinase"Mol.Cell.Biol.. (in press). (2004)

2003 年度 実績報告書

Wntシグナル伝達経路の制御による大腸癌肝転移治療法の開発-Axin遺伝子とTCFおとり遺伝子の導入をHVJ-Eを用いて行う-

研究代表者

岡島 正純 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (90274068)

研究成果

[文献書誌] Ikeda, S.: "Immunohistochemical and Mutationl Analysis of β-catenin, Ki-ras, and p53 in Two Subtypes of Colorectal Mucinous Carcinoma"Clinical Cancer Research. vol 9. 5660-5665 (2003)

[文献書誌] Ishizaki, Y.: "Immunohistochemical analysis and mutationl analysis of β-catenin, Axin family and APC genes in hepatocellular carcinomas"INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY. (in press). (2004)

[文献書誌] Yamamoto, H.: "Sumoylation is involved in beta-catenin-dependent activation of TCF-4"EMBO J.. 22. 2047-2059 (2003)

[文献書誌] Kikuchi, A.: "Tumor formation by genetic mutations in the components of the Wnt signaling pathway"Cancer Sci.. 94. 225-229 (2003)

[文献書誌] Oshita A.: "Identification and characterization of a novel Dvl-binding protein that suppresses Wnt signaling Pathway"Genes Cells. 8. 1005-1017 (2003)

[文献書誌] Kishida, S.: "Wnt-3a and Dvl induces neurite retraction by activating Rho-associated kinase"Mol.Cell.Biol.. (in press). (2004)

2003 年度実績報告書

岡島正純広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (90274068)