| 研究課題/領域番号 |
14370432
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
齋藤 洋一 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (20252661)
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| 研究分担者 |
加藤 天美 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (00233776)
吉峰 俊樹 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (00201046)
恵口 豊 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (20243206)
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| キーワード | gene therapy / HVJ-E / Tet-on system / NL1 |
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| 研究概要 |
1)Tet-on systemにneprilysinの一種であるNL1にヒト型ベータエンドルフィン(End)遺伝子を連結したものを遺伝子組み換えし、HEK293細胞に遺伝子導入した。In vitroにおいてHEK293細胞は、投与したドキシサイクリン(Dox)の用量依存性に、Endを分泌するようになった。一方、Tet-on systemにブタPOMC遺伝子を組み込み、Neuro2A細胞に遺伝子導入したところ、ACTHとEndの両者を分泌するようになった。そのNeuro2A細胞をポリマーカプセルに封入して、サルの脊髄腔に移植した。1週間後、サルにDoxを100mg朝夕2回筋注、300mg朝夕2回筋注して、大槽から髄液を採取し、髄液中のACTHを測定した。カプセルなし、カプセル移植後、Dox 100mg朝夕2回筋注後、300mg朝夕2回筋注後と髄液中のACTH濃度は段階的に上昇していた。髄液中にDoxが移行し、カプセル封入されたNeuro2A細胞に作用し、Tet-on systemが働き、ACTHを分泌したと考えられる。次に遺伝子導入したHEK293細胞をカプセル移植して髄液中のEndを測定したが、Doxの筋注量を増加してもEndは測定不能であった。本細胞のviabilityの問題ではないかと考えている。
2)アカゲザルとラットの大槽内に、レポータージーンであるLacZまたはGFP-ODNまたはDsRedをHVJ-Eに封入して遺伝子導入し、最終遺伝子導入から1週間後に処分し還流固定した。脳を取り出し、50ミクロンの凍結切片を作成し、脳内とくも膜下腔の動脈壁へのレポータージーンの導入を検討したが、非常に遺伝子導入効率が高い場合と低い場合が存在した。HVJ-Eによる遺伝子導入効率の不安定性の原因検討を行っているが、詳細は不明で、生理実験は行っていない。
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