| 研究課題/領域番号 |
14370553
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
阿部 俊明 東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (90191858)
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| 研究分担者 |
和田 裕子 東北大学, 病院・講師 (70302130)
富田 浩史 東北大学, 医学系研究科, 助手 (40302088)
佐藤 肇 東北大学, 病院・助手 (10312571)
大和 雅之 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (40267117)
岡野 光夫 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (00130237)
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| キーワード | 網膜色素上皮細胞 / 虹彩色素上皮細胞 / 脳由来神経栄養因子 / アデノアソシエイトウイルス / 細胞移植 / BDNFリセプター / 免疫染色 / in situ hybridization |
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| 研究概要 |
我々は自己の虹彩色素上皮細胞(IPE)であれば培養して網膜下に移植しても安全であることを報告してきた。また遺伝子導入を利用することで、神経栄養因子(脳由来神経栄養因子(BDNF)など)を分泌する細胞にして移植すると、連続光照射によるラットの視細胞変性を保護することを報告した。この遺伝子導入にすでに臨床応用されており、しかも病気との関連が知られていないアデノアソシエイトウイルス(AAV)を使用することを検討した。AAVにBDNF遺伝子を導入し(AAV-BDNF)、IPEに感染させ(AAV-BDNF-IPE)、この細胞を移植すると、局所的にも全身的にも副作用は見られず、視細胞の光障害に対する保護効果は3か月を過ぎても見られた。またAAV-BDNF濃度は1x10^7capsids/ml以上で保護効果があることが判明したが、これ以上の濃度にしても濃度依存的な保護効果は見られなかった。移植細胞が長期間網膜下に存在することを考えると、その作用機序にリセプターなどの複雑な関与が考えられたために、BDNFリセプターのTrkBの発現と局在の変化を調べた。その結果、TrkBは網膜内で複数のisoformが存在し、それらは必ずしも同じ細胞に発現するものではないことも判明した。しかも、BDNFや光刺激によりそれぞれのisoformは主としてミューラー細胞で発現誘導がおきるが、細胞内の局在も異なる可能性が示唆された。さらにこの発現誘導は刺激時間によりそれぞれ違った時期に発現が誘導されることが判明した。これらの結果は免疫染色、western blotting、ならびにin situ hybridizationで確認した。
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