細胞増殖シグナル伝達・異常と口腔扁平上皮癌

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14370579
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 土田 信夫 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (60089951)
• 研究分担者: 中島 琢磨 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (90256678) ; 小村 健 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (10334434) ; 天笠 光雄 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (00014332)
• キーワード: 口腔癌 / EGG / 増殖シグナル / ERK / 生存シグナル / AKT / NAF1 / リン酸化

研究概要

口腔癌発症機構解明のため細胞株を用いてEGFからの細胞増殖・生存シグナルの異常およびERK2結合蛋白の解析を主に行ない以下の結果を得た。1)EGFRを中心とする細胞増殖シグナル伝達の異常。4つの細胞株で血清飢餓条件下でERK2のリン酸化による構成的活性化を観察した。構成的活性化はEGFR-Ras-Raf-ERK経路以外によると思われる結果を得た。また1つの細胞株ではPAGEで移動度が早く、構成的にリン酸化され、変異をもつERK2分子種を検出した。一方AKT生存シグナルの異常については、473位のリン酸化が高レベルでしかも構成的に発現する細胞株が過半数で検出された。2)ERK2結合蛋自質の解析。酵母TWO HYBRID系で得られたクローンのうち、Naf1とSNT2について解析を進めた。NAFIはERKでリン酸化されるが活性化ERKを細胞質でtrapし核移行を抑制することでEGFからERKに至る増殖シグナルをattenuateした。Naf1はさらにG2/M期でリン酸化されること、N-末端側の欠質変異のリン酸化は検出されないこと、過剰発現させたときに細胞増殖に大きな影響はない等の知見を得た。SNT2については完全長のものを作成し、GSTをもちいて、in vitroでのERK2ととの結合を確認した。3)Microarrayによる解析。細胞株についてcDNA microarrayでの発現レベルとCGHによる遺伝子コピー数との間に相関を認め、増殖開連遺伝子レベル解析の準備を整えた。4)学内倫理委員会の承認を得て口腔癌組織の収集を行なった。

研究成果

• [文献書誌] Zhang S, Nakajima T, Amagasa T, Tsuchida N. 他: "A new ERK2 binding protein, Naf1, attenuates the EGF/ERK2 nuclear signaling"Biochem Biophys Res Commun.. 297-1. 17-23 (2002)
• [文献書誌] Gao CF, Ren S, Wang J, Zhang SL, Jin F, Nakajima T, Ikeda M, Tsuchida N.: "P130 and its truncated form mediate p53-induced cell cycle arrest in Rb(-/-) Saos2 cells"Oncogene.. 21・49. 7569-7579 (2002)
• [文献書誌] Zhang C, Gao C, Kawauchi J, Hashimoto Y, Tsuchida N, Kitajima S: "Transcriptional activationof the human stress-inducible transcriptional repressor ATF3 gene promoter by p53"Biochem Biophys Res Commun.. 297. 1302-1300 (2002)
• [文献書誌] Wiswanathan M, Tsuchida N, Shanmugam G: "Promoter hypermethylation profile of tumor-associated genes p16, p15, hMLH1, MGMT and E-cadherin in oral squamous cell carcinoma"Int. J Cancer. (印刷中). (2003)