口腔癌細胞―間質細胞の相互応答による腫瘍間質誘導の分子機構

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14370581
• 研究機関: 新潟大学
• 研究代表者: 朔 敬 新潟大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (40145264)
• 研究分担者: 大城 和文 新潟大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (50332648) ; 依田 浩子(米持) 新潟大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (60293213) ; 程 くん 新潟大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (40207460) ; 鈴木 誠 新潟大学, 歯学部附属病院, 講師 (50107778)
• キーワード: 扁平上皮癌 / 線様嚢胞癌 / 細胞共培養 / 癌細胞 / 間質細胞 / 細胞外基質 / リアルタイムPCR / マイクロディセクション

研究概要

(1)細胞培養系による口腔癌細胞と間質細胞の細胞外基質生合成:ヒト唾液腺腺様嚢胞癌由来細胞ACC2、ACC3細胞、ACC2細胞よりクローン化した高転移能を有するACC-M細胞、舌扁平上皮癌由来細胞MK-1、ZK-1およびZK-2細胞と乳児口腔腫瘍由来線維芽細胞の初代培養細胞、そのほか各種ヒト由来株化線維芽細胞について、ヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)とファイブロネクチン(FN)の細胞外基質分子およびインテグリン(INT)分子の発現を観察するため、現在までに確立した方法で培養維持した。各癌細胞と線維芽細胞系細胞とを共培養して、上記各分子の発現を検討する実験では、両細胞密度の比率を調整して最適な培養条件を決定した。培養は播種後集密化まで約10日間複数系列で継続し、48時間毎に、固定、蛍光抗体法による蛋白質発現とRNA抽出ポリメラーゼ連鎖反応による遺伝子発現とを検討した。その結果、間質細胞の共存下では細胞外基質分子の発現は癌細胞で有意に低下した。すなわち、生体内では間質細胞の産生する細胞外基質を癌細胞が接着遊走すなわち浸潤に利用している可能性がしめされた。
(2)ヒト口腔癌組織における細胞外基質産生の担当細胞の決定:当講座に保管している過去の口腔癌手術症例の組織パラフィンブロックから切片を作製し、免疫組織化学(蛋白質)およびハイブリッド組織化学(mRNA)によって、細胞外基質分子の沈着とその生合成を検討した。その結果、間質細胞にくらべて意外にも腫瘍細胞の細胞外基質分子遺伝子発現レベルは高く、とくに浸潤先端では亢進していた。したがって、間質細胞の産生する細胞外基質のほかに、実質-間質界面では腫瘍実質細胞はみずから細胞外基を産生して、自身の増殖浸潤にふさわしい環境をつくりだしている可能性があることが秋垢となった。
(3)レーザ・キャプチャー法による細胞組織の選択的微小切り出し回収:前項のように準備した組織切片ならびに培養細胞を、レーザ・マイクロディセクション装置によって、実質と間質との界面域を中心に、癌細胞と間質細胞とを分離してそれぞれ回収し、遺伝子を抽出する条件を設定した。あわせて、リアルタイムPCR法によってそれらの発現量の比較定量をおこなう条件設定をおこなった。

研究成果

• [文献書誌] Ito M: "Jaw bone remordeling at the invasion front of gingival squamous cell carcinomas"J Oral Pathol Med. 32(1). 10-17 (2003)
• [文献書誌] Saku T: "Epstein-Barr virus infected lymphepithelial carcinomas of the salivary gland in the Russia-Asian area : a clinicopathologic study of 160 cases"Arch Pathol. 47(1). 35-40 (2003)
• [文献書誌] 朔 敬: "口腔粘膜扁平上皮癌とその境界病変:組織学的評価に関する新しい動向とその病理学的背景"新潟歯学会雑誌. 32(2). 209-224 (2003)
• [文献書誌] Ohtake S: "Precancerous foci in pleomorphic adenoma of the salivary gland : recognition of focal carcinoma and atypical tumor cells by P53 immunohistochemistry"J Oral Pathol Med. 31(10). 590-597 (2002)
• [文献書誌] Ida-Yonemochi H: "The basement membrane type heparan sulfate proteoglycan (perlecan) in ameloblastomas : its intercellular localization in stellate reticulum-like foci and biosynthesis by tumor cells"Virchows Arch. 441(2). 165-173 (2002)
• [文献書誌] Oda Y: "Expression of adhesion molecules in O1-N, hamster squamous cell carcinoma with high potential of lymph node metastasis"Oral Med & Pathol. 7(1). 9-18 (2002)
• [文献書誌] Frierson HF: "Large scale molecular analysis identifies genes with altered expression in salivary adenoid cystic carcinoma"Am J Pathol. 161(4). 1315-1323 (2002)