| 研究概要 |
リボソーム再生因子RRFの関わる分子間相互作用をNMRによって検出するために、様々な菌種由来のリボソーム再生因子のクローニング、大量発現系の構築並びに精製系の確立をおこなった。結果として、E. coli, V. parahaemolyticus, P. aeruginosa, T. maritima, T, thermophilus, A. aeolicus由来RRFについて、^<13>C,^<15>N等の安定同位体で標識した試料を大量調製する系を確立した。続いて、多核多次元NMR法によってNMRシグナルの帰属を行い、上記のRRFについて主鎖原子の帰属を完了することができた。また、RRF阻害剤の合理的設計のため、新たにE. coli由来RRF変異体及びV. parahaemolyticus由来RRFについてX線結晶構造解析によってその立体構造を決定した。これは常温菌由来RRFの単独状態での立体構造としては最初のものである。立体構造が決定されたRRFに対してはその阻害剤候補をコンピューターを利用したデータベースからのバーチャルスクリーニングによって選別した。また安定同位体標識したRRFと得られたライブラリー分子群との相互作用をNMRによって検出することを試み、実験系の最適化を行った。
さらにRRFとリボソームとの相互作用様式を解明することでRRF阻害剤設計のための知見を得ることを目的として、RRFのドメイン相当分子を設計・調製し、リボソームとの結合を表面プラズモン共鳴等の手法によって解析した。その結果、RRFとリボソームとの新たな結合モデルを提唱することができた。また設計した分子がRRFを競合的に阻害することを明らかとし、それを最適化することによって新規なリボソーム再生系阻害剤を開発できる可能性を示すことができた。
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