突然変異生成機構の分子遺伝学的解析:個体レベル及び分子レベルでの解析系の確立

2002 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 14380251
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 藤堂 剛 京都大学, 放射線生物研究センター, 教授 (90163948)
• キーワード: TLS DNAポリメラーゼ / DNA複製酵素 / 突然変異生成 / ショウジョウバエ / DNA修復

研究概要

TLS (Trans Lesion Synthesis) DNA Polymeraseは、損傷を乗り越えてDNA複製を行うDNAポリメラーゼであり、突然変異生成のみならず、細胞周期停止やアポトーシス等、DNA損傷に対する生体応答に関して、重要な役割を担っている。我々は、ショウジョウバエを用い、TLS DNA Polymeraseの機能解析及び生物学的役割を明らかにすることを目指している。ショウジョウバエよりRad30A, Rad30B, Rev1遺伝子を単離した。その生化学的活性をin vitroで測定することにより、哺乳動物やバクテリアの酵素との類似点及び相違点を明らかにした。また、高発現系及びRNAiを用いた発現抑制系を用いたin vivo, in vitroいずれの系においても、この遺伝子産物の量は一定に保たれている事を明らかにした。この遺伝子産物のDNA損傷応答における役割を考える上で興味深い。また、細胞内分布を観察したところ、特異的な局在を示すことが明らかになった。今後、これらの特徴を示す領域を同定するとともに、突然変異体を作成する事により、その生物学的意義を明らかにしていきたい。

研究成果

• [文献書誌] Veber, C.W.M.Kay, H.Mogling, K.Mobius, K.Hitomi, T.Todo: "Photoreactivation of the Flavin cofactor in xenopus laevis (6-4)Photolyase : Observation of a transient tyrosyl radical by time-resolved electronmagnetic resonance"Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99. 1319-1322 (2002)
• [文献書誌] T.Ishikawa, J.Hirayama, Y.Kobayashi, T.todo: "Zebrafish CRY represses transcription mediated by CLOCK-BMAL heterodimer with out inhibiting its binding to DNA"Genes Cells. 7. 1073-1086 (2002)
• [文献書誌] R.Brudler, K.Hitomi, H.Daiyasu, H.Toh, K.Kucho, M.Ishiura, M.Kanehisa, V.Roberts, T.Todo, J.Tainer, E.Getzoff: "Identification of a new cryptochrome class : structure, function and evolution"Mol Cell.. 11. 59-67 (2003)
• [文献書誌] J.Hirayama, I.Fukuda, T.Ishikawa, Y.Kobayashi, T.Todo: "New role of zCRY and zPER2 as regulators of sub-cellular distributions of zCLOCK and zBMAL proteins"Nucleic Acids Res. 31. 935-943 (2003)